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利用RTPCR技术检测吊瓜病毒种类研究 　　摘要：小西葫芦黄花叶病毒（Ｚｕｃｃｈｉｎｉ ｙｅｌｌｏｗ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，ＺＹＭＶ）、西瓜花叶病毒（Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，ＷＭＶ）、黄瓜花叶病毒（Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，ＣＭＶ）、南瓜花叶病毒（Ｓｑｕａｓｈ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，ＳｑＭＶ）和番木瓜环斑病毒（Ｐａｐａｙａ ｒｉｎｇｓｐｏｔ ｖｉｒｕｓ，ＰＲＳＶ）是危害葫芦科作物最严重、最广泛的５种病毒。根据已知的５种病毒序列设计特异性引物，对感染病毒的吊瓜总ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增。结果表明长兴吊瓜的病毒种类主要为ＰＲＳＶ，感染率为１００％，无复合病毒感染。吊瓜植株不同取样部位（茎尖、卷须、嫩叶、茎、花、子房、老叶等）的ＲＴ－ＰＣＲ表明老叶是较好的病毒检测取样部位，而嫩叶是吊瓜脱毒最佳的外植体取样部位。对茎尖的ＰＲＳＶ表达量高过幼叶的原因也进行了分析，认为可能是病毒的表达量与植株的代谢强度有关。 　　关键词：吊瓜；ＲＴ－ＰＣＲ；病毒检测；病毒分布 　　中图分类号：Ｓ６４２ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）09－1904-04 　　 　　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｉｎ Ｃａｕｓａｌ Ｖｉｒｕｓｅｓ in Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ ｂｙ ＲＴ－ＰＣＲ 　　 　　ＸＵ Ｊｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｚｈｅｎ－ｈｕａ，ＰＡＮＧ Ｊｉ－ｌｉａｎｇ 　　（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００３６，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｚｕｃｃｈｉｎｉ ｙｅｌｌｏｗ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ（ＺＹＭＶ）， Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ（ＷＭＶ）， Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ （ＣＭＶ）， Ｓｑｕａｓｈ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ （ＳｑＭＶ） ａｎｄ Ｐａｐａｙａ ｒｉｎｇｓｐｏｔ ｖｉｒｕｓ （ＰＲＳＶ） ａｒｅ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｅｒｉｏｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎｆｅｃｔｉｎｇ ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅｏｕｓ ｃｒｏｐｓ． Ｆｉｖｅ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ５ ｖｉｒｕｓｅｓ， ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＲ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ Ｍａｘｉｍ． ｌｅａｖｅｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｖｉｒｕｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｔ． ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ ｉｎ Ｃｈａｎｇｘｉｎｇ ｗａｓ ＰＲＳＶ ｗｉｔｈ １００％ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ａｓ ｎｏ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ． Ｔｈｅ ＲＴ－ＰＣＲ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓａｍｐｌｉｎｇ ｐａｒｔｓ ｏｆ Ｔ． ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｐａｒｔ ｆｏｒ ｖｉｒｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｌｄ ｌｅａｖｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｓｔｖｉｒｕｓ－ｆｒｅｅ ｐａｒｔ ｗａｓ ｙｏｕｎｇ ｌｅａｖｅ． Ｔｈｅ ｃａｕｓｅ ｏｆ ｍｏｒｅ ＰＲＳＶ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｓｈｏｏｔ ｔｉｐ ｔｈａｎ ｉｎ ｙｏｕｎｇ ｌｅａｖｅｓ ｗａｓ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ， ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｗａｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｐｌａｎｔ＇ｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ Maxim.； ＲＴ－ＰＣＲ；ｖｉｒｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ； ｖｉｒｕｓ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ 　　吊瓜，学名栝楼（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓ ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ Ｍａｘｉm．），属葫芦科多年生蔓性藤本植物。其根、茎、叶、瓜皮、种子均可供药用，富含三萜皂甙、有机酸、树脂、糖类、色素、蛋白质、脂肪油等，有解热止渴、利尿、镇咳祛痰等功效，并具抗肿瘤的作用。近年来，随着吊瓜开发和研究的不断深入，吊瓜子也已成为炒货中的佳品，它浓香扑鼻，深受消费者喜爱，市场前景极为广阔。吊瓜通常以种子或扦插繁殖，种子繁殖由于混交严重，种质退化迅速；扦插繁殖时