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化妆品刺激性评价方法研究进展 　　摘 要：随着经济的快速发展，化妆品行业也迎来了发展高峰期。目前化妆品的种类繁多，其品质也是参差不齐，但是都在一定程度上对皮肤有一定的刺激性。本文综述了目前法规认可的国内外化妆品刺激性评价的体内和体外替代方法，重点从原理、方法、应用等方面介绍了眼睛、皮肤刺激、腐蚀性评价体外替代方法，共包括9种眼刺激、腐蚀性、3种皮肤腐蚀性、1种皮肤刺激性评价方法。最后提出体外替代方法虽然有待进一步成熟，但已经成为全球发展趋势，而我国应结合国情积极建立相应的体外替代方法。 　　关键词：化妆品；刺激性评价；方法；研究 　　1前言 　　刺激性物质作用于机体后可能引发机体产生刺激、过敏等一系列的生理、生化反应，其中最主要的是刺激反应，可导致水肿、红斑、瘙痒、疼痛等症状。包括欧美国家在内的多国化妆品法规均明确规定了化妆品原料和产品应进行相应的眼睛、皮肤的刺激性安全评价。我国《化妆品安全技术规范》（2015版）中“毒理学试验方法”规定，化妆品新原料需进行皮肤和急性眼刺激性、腐蚀性试验，同时化妆品产品在投放市场前，对于每天使用的化妆品需进行多次皮肤刺激性试验；对于间隔1日或数日使用或使用后冲洗的化妆品需进行急性皮肤刺激性试验；使用时可能与眼睛接触的产品需进行急性眼刺激试验。长期以来，皮肤、眼睛刺激性试验主要依赖动物试验，Draize兔眼试验是测定急性眼刺激的国际标准方法，Draize试验也是国际公认的动物皮肤刺激性试验标准。 　　近年来，以欧盟为首的全球众多国家和地区纷纷呼吁禁止在化妆品安全评价中使用动物试验：欧盟2004年开始禁止化妆品成品动物试验和禁止销售经过动物试验的化妆品成品，2013年3月全面禁止化妆品动物试验并禁止销售经过动物试验的化妆品；新西兰自2015年5月起禁止在化妆品及成分研究、制造、测试和教学中使用动物试验；印度自2014年11月起禁止进口经过动物试验的化妆品等。禁止动物试验在化妆品安全性评价中的使用已成为全球趋势，推动了替代动物试验的体外评价方法的开发和应用。 　　2眼刺激评价 　　在某些情况下，眼睛可能成为化妆品及其成分作用的靶器官或吸收途径，从而引起眼刺激、腐蚀，故眼刺激、腐蚀性的评价是化妆品及其成分安全性评价的必要内容。目前，常用的方法有体内和体外替代法，体内方法已使用多年，近几十年对体外替代方法进行了大量的研究与验证。 　　2.1体内试验方法 　　兔眼试验在2008年前是测定急性眼刺激的国际标准方法，目前仍是我国化妆品法规中规定的眼刺激性、腐蚀性评价的标准。虽然长期以来，兔眼试验被认为是评估眼刺激性、腐蚀性的唯一标准方法，但该方法试验周期长、成本高，且动物试验结果与人体仍有一定的差异性，其科学性及合理性有待进一步验证。 　　2.2体外试验方法 　　至今，已有多种动物替代试验的体外方法被开发和应用。其中已有5种方法得到了OECD的认可，2种经过了ECVAM的验证。 　　2.2.1牛角膜浑浊和渗透性试验 　　BCOP法利用离体牛眼角膜，将受试物直接与牛角膜接触，刺激物可导致角膜上皮屏障功能破损和基质蛋白变性，将牛角膜的浑浊度和渗透性作为毒理学的评价指标，根据公式计算与两个指标数值相关的体外刺激分数（InVitroIrritancyScore，IVIS），通过评分进行分类：若IVIS55，则受试物具有严重眼刺激性，不需要其他方法验证；IVIS≤3，则无刺激性；若3IVIS≤55，则无法判断，需结合其他替代方法进一步测试。BCOP法可用于评估化学物的严重眼刺激性和腐蚀性或无刺激性，无法准确区分轻微、中等刺激，且无法区分严重眼刺激与眼损伤，该方法不受样品剂型、溶解性的限制。 　　2.2.2离体鸡眼试验 　　ICE法利用短期离体培养的鸡眼球进行眼刺激检测。取鸡眼球固定于夹持器，暴露受试物，通过肉眼检查、测量角膜厚度、表面灌流和荧光素渗透评价角膜损伤程度，将角膜膨胀度、角膜浑浊度和荧光素滞留度的数值作为毒理学终点，根据终点数值分别对三个评价维度进行ICE分类，包括I、II、III、IV，最后通过三个评价指标的终点组合分析：（1）若终点组合为3×I、2×I和I×II，则无刺激性；（2）若终点组合为3×IV、2×IV和I×II、2×IV和1×II、2×IV和IV×I、30min时角膜浑浊度≥3（至少两只眼球）、任何时间点角膜浑浊度=4（至少2只眼球）、上皮严重松弛（至少1只眼球），则有严重眼损伤和眼腐蚀；（3）若为其他情况，则无法判断。ICE法可用于鉴别化学物的眼腐蚀和严重眼损伤或无刺激性，但无法区分严重眼刺激、眼损伤。该方法适用于固体、液体、乳剂、凝胶状化合物。 　　2.2.3荧光素漏出试验 　　FL法是一项基于细胞毒性和细胞屏障功能的眼刺激替代试验。将受试物暴露后，以导致