卡托普利对心梗后心衰大鼠尿液代谢组学影响.docVIP

卡托普利对心梗后心衰大鼠尿液代谢组学影响 　　摘要：目的研究卡托普利对心肌梗死后心衰大鼠尿液代谢组学的影响。方法采用结扎左冠状动脉前降支致心肌梗死后心力衰竭大鼠模型，术后随机分为模型组、卡托普利组，给药8周后，利用核磁共振氢谱（1HNMR）技术检测大鼠尿液小分子及大分子代谢物，建立大鼠尿液的代谢图谱，并采用主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘判别分析（OPLSDA）对代谢图谱进行主成分分析及模式判别，以观察卡托普利对心衰大鼠尿液代谢组学的影响。 结果模型组与卡托普利组尿液小分子及大分子代谢物均能明显区分。与模型组相比，卡托普利组谷氨酰胺、肌肝、牛磺酸、柠檬酸、苹果酸、苯基丙氨酸含量升高；3羟基丁酸、乙酸、丙酮、磷脂酰胆碱、三甲胺、马尿酸含量下降。结论心梗后心衰大鼠尿液代谢组学出现变化，卡托普利能有效调控紊乱的代谢产物，促使代谢表型向正常范围回归。 　　关键词：尿液代谢组学；核磁共振；心衰大鼠；卡托普利 　　中图分类号：R541.6R256.2文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn2014.03.048文章编号2014 　　代谢组学是研究生物体受病理生理刺激或基因改变而引起的体内代谢物动态变化的一门科学，其研究的技术和方法日趋成熟，在病变标志物的发现、疾病的诊断和治疗、药物药效及毒理安全性评价等方面得到了广泛的应用[13]。ACEI类药物被公认为治疗心力衰竭的重要药物，卡托普利作为ACEI的代表，已被证实其可以有效抑制RAAS，限制心室重构，降低心衰患者的发病率和死亡率[4]。本研究采用1HNMR技术研究卡托普利对心梗后心衰大鼠尿液代谢组学的影响，进一步探讨卡托普利治疗心衰的机制。 　　1材料与仪器 　　1.1实验动物正常雄性SD大鼠20只（体重200 g～250 g），购自北京维通利华实验动物有限公司，许可证号：SCXK（京，分笼饲养于中国中医科学院广安门医院SPF级动物房。 　　1.2实验药物卡托普利（批号。 　　1.3实验仪器Bruker AVANCE Ⅲ600 MHz超导傅立叶变化核磁共振波谱仪（Bruker Corporation，Switzerland），主要配置：场强为11.75T（500MHz）的超导磁体，1H/13C/31P/19F四核探头、梯度反相探头（109Ag31P）、固体高分辨魔角旋转探头（15N31P）；HX200动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；Value plus系列超低温冰箱（Thermo Revco，USA）；Cenirifuge5415D台式低温115pk超速离心机（EppendorfMiniSpin/plus，German）。 　　1.4动物模型复制参照Pfeffer[5]报道的方法复制心衰动物模型。 　　1.5实验分组动物购回后喂养标准合成饲料，适应性喂养3 d，禁食12 h后造模。术后24 h对模型大鼠行超声心动图检测，以射血分数（EF）减损15%为入选标准。将入选模型大鼠随机分为模型组、卡托普利组，每组大鼠不少于6只。 　　1.6实验给药模型组生理盐水4.0 ml/kg灌胃，每天一次；卡托普利组100 mg/kg溶于生理盐水中灌胃。各组连续给药8周。 　　1.7尿液采集及处理各组大鼠灌胃8周后，以代谢笼收集大鼠24 h尿液，经4℃，12 000 r/min离心15 min，取上层尿液，于-80℃冰箱中保存。室温解冻后取20 μL上清，添加D2O：H2O为1∶9和0.05% TSP的混合液40 μL，最后将制备好的尿液样品加入1.7 mm核磁样品管中，使用Bruker AVANCE Ⅲ600 MHz超导傅立叶变化核磁共振波谱仪进行测量。 　　1.8数据采集和处理分别采用弛豫时间编辑（CarrPurcellMeiboomGill，CPMG）和扩散编辑（longitudinal eddydelay，LED）脉冲序列检测尿液中小分子及大分子代谢物。在超导傅立叶变换NMR仪上调用NOE相关2DNMR谱（nuclear overhauser effect spectroscopy， NOESY）脉冲序列，设置参数。实验参数：谱宽8 000 Hz，预饱和时间为2 s，采样点数32 k，累加次数128次，预饱和频率和中心频率都在水峰位置。自由感应衰减（free induction decay，FID）信号经过填零为32k点后，再加上0.5 Hz的线增宽因子，经傅立叶变换转为1HNMR图谱。以TSP的化学位移参考峰的位置，设为0。调用AMIX （Analysis of MIXtures software v.3.0，Bruker Biospin）软件中的程序将0.