生物奥赛辅导--细胞生物学.ppt

二、细胞工程的基本技术 1、细胞培养 所谓细胞培养，就是将生物有机体的某一部分组织取出一小块，在体外经过表面消毒处理后，使其分散成单个游离的细胞，并放置在人工配制的培养基中进行培养，使之生长、分裂的技术。细胞培养有时又叫组织培养或统称为细胞与组织培养。 （1）细胞培养 植物细胞与动物细胞的一个重要差别在于它具有发育的全能性。也就是说在适宜的条件下，一个来自己分化的根、茎、叶等组织的细胞，经过离体培养可以发育成同其亲本一样的完整植株。植物细胞的全能性，是植物细胞工程创立的重要理论基础。 * 植物细胞培养的基本过程包括如下几个步骤：①从健康植株的特定部位或组织，选择用于组织培养的起始材料，称之为外植体。②对外植体表面消毒，建立无菌培养体系。③形成愈伤组织和器官。 （2）动物细胞培养 动物细胞培养的主要步骤如下：①从动物体内，无菌条件下取出适量组织。②加入适宜浓度的胰蛋白酶或胶原纤维酶等使细胞分散。③将分散的细胞进行洗涤并纯化后加在培养基中，37℃下进行原代培养，并适时进行传代培养。 * 2、细胞融合 动物细胞融合与植物细胞融合的原理和步骤基本是相似的，只是植物细胞融合必须先制备原生质体，即以纤维素酶等组成的混合酶液消化植物细胞壁，经过滤、离心、洗涤后制备成原生质体悬浮液。然后，诱导融合：将两亲本原生质体的悬浮液混合，加入融合诱导剂PEG，这时原生质体膜彼此接触，然后融合成原生质体异核体。培养数天后，原生质体再生出细胞壁，细胞在分裂过程完成核的融合，这种细胞称杂种细胞。最后，选择、诱导和分化，获得杂种植株 。 * 三、植物细胞工程 1、微繁殖技术 植物的微繁殖技术，又称快速繁殖技术，是利用植物组织培养方法将植物体某一部分的组织小块，进行培养并诱导分化成大量的小植株，从而达到快速无性繁殖的目的，也称它为试管苗繁殖。其特点是繁殖速度快，周期短，不受季节气候、自然灾害等因素的影响，并可实现工厂化生产。 * 2、植物的去病毒技术（又称脱毒技术） 在感染病毒的植株中，病毒的分布是不一致的。在老叶片及成熟组织和器官中，病毒含量较高，但幼嫩的和未成熟的植物部位，病毒的含量较低，而在生长点约0.1～1mm时，则几乎不含病毒颗粒。所谓植物的去病毒技术，实质上就是采取不含病毒颗粒或病毒颗含量甚少的茎尖作为外植体，进行微繁殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。 * 3、人工种子 人工种子是由体细胞胚、人工胚乳和人工种皮三个部分组成。 体细胞胚是制作人工种子的起始材料。它既可由外植体的表皮细胞直接产生，也可由愈伤组织的表层细胞产生。人们还发现细胞培养中的单细胞，花粉中产生单倍体体细胞和原生质体培养在适当条件下均可获得体细胞胚。人工胚乳是包埋体细胞胚的胶状介质，可人为地在其中加入各种营养物质和生长调节剂。 * 4、单倍体育种 是在植物育种中，把由常规杂交后获得的第一代植株的花粉，在离体条件下进行人工培养诱导成单倍体小植株，然后人工加倍成正常的二倍体纯系。这样，克服杂交子二代性状的分离现象，加速育种进程。 * 5、次生物质与植物细胞的大量培养 植物体内积累的一些不参与植物基本生命过程的代谢中间分子称为次生代谢物或天然产物。直接从植物中提取这类物质有时会造成资源的重大浪费，且产量低，利用细胞培养方法是解决这些问题的很好途径 * 四、动物细胞工程 1、淋巴细胞杂交瘤与单克隆抗体 根据癌细胞可以在体外培养条件下无限传增殖这一特性，在PEG的作用下，将它与B淋巴细胞进行融合，结果得到了具有双亲遗传特性的杂交细胞。它既能在体外迅速增殖，又能合成分泌特异性抗体，从而成功地解决了从一个淋巴细胞制备大量单克隆抗体的技术难题，这项技术就是淋巴细胞杂交瘤技术。淋巴细胞杂交瘤技术的基本步骤参见高中生物教材。 * 2、胚胎干细胞 胚胎干细胞简称ES细胞，具有发育上的全能性。ES细胞被注射到正常动物的胚腔内，能参于宿主内细胞团的发育，广泛地分化成各种组织。此外，ES细胞还有一个突出的特点，它可以在体外进行人工培养.扩增，并能以克隆的形式保存。 * 3、细胞融合 在细胞融合过程中，开始阶段只来自两个细胞的细胞质先聚集在一起，而细胞核仍保持彼此独立，这种特定阶段的细胞结构称为合胞体。其中含有两个或多个相同细胞核的叫同型合胞体，而含有两个或多个不同细胞核的叫异型合胞体，或称异核本。 * 细胞融合通过人工的方法克服了存在于物种之间的遗传屏障，从而能够按照人们的主观意愿，把来自不同物种的不同组织类型的细胞融合在一起，这不仅对遗传育种有利，而且也可为遗传学研究提供新的手段。 * 4、细胞核移植 利用细胞核移植技术，通过不同细胞质与细胞核之间的组合，可以更明确而深刻地研究不同组织和不同发育时期的细胞核的功能及其与细胞质之间的相互作用。 * （3）