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响应面法优化烟草游离烟碱提取工艺研究 　　摘要： 为研究提取因素对烟草中游离烟碱的提取得率的影响。在单因素试验基础上，选择提取溶剂中液料比、提取时间、提取温度和摇床转速，进行4因素3水平Box-Behnken试验设计，采用响应面法（RSM）分析了4个因素对响应值（游离烟碱得率）的影响。结果表明，水提取-有机溶剂萃取法提取烟草中游离烟碱的最优条件如下： 液料比30∶1（V/m，mL/g），提取时间33 min，摇床转速212 r/min和提取温度34 ℃。在最优的条件下进行了5次验证试验，游离烟碱的平均得率为7.01 mg/g，与理论值（6.98 mg/g）的误差为0.43%，说明该优化方法可行。 　　关键词：烟草；游离烟碱；提取；响应面优化 　　中图分类号：S572 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）16-3922-04 　　烟碱是烟草中的一种特殊的生物碱，以游离态、质子态两种形态存在[1]。卷烟的品质和劲头不仅与烟草及主流烟气中的烟碱总含量有关，与烟碱形态也有着密切的关系，游离态烟碱易挥发，主要以气相形态存在，易于穿透口腔黏膜从而更快速地被人体吸收，能对中枢神经产生强烈的作用，抽吸时具有较强的劲头[2，3]，而质子态烟碱被口腔吸收的相对慢一点，抽吸时劲头较弱。所以针对不同形态的烟碱进行研究和测定是十分必要的。 　　烟草中烟碱与有机酸结合所形成的盐类为极易解离的弱酸弱碱盐，因而要准确测定烟草中游离态烟碱的绝对含量有一定的难度，其提取方法是至关重要的[4]。目前烟草中游离烟碱含量的提取和测定方法各异，测定结果也有所不同，为得到一个稳定而准确的可以用于长期检测的方法，笔者根据前期试验和参考文献[5，6]，利用响应面法[7]优化了烟草游离烟碱提取条件，旨在为烟草烟碱形态对烟草品质的影响提供支撑。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　烟碱（纯度大于98%，0 ℃下保存）；正十七烷（纯度大于99%，New Jersey USA）；三氯甲烷（色谱纯，北京化工厂）；氢氧化钠（AR，天津市科密殴化学试剂开发中心）；烟叶（石家庄卷烟厂提供）；BS-4GBS-4G全温振荡培养箱（江苏省金坛市金祥龙电子有限公司）；6890GC/5973MS气质联用仪（美国安捷伦公司）。 　　1.2 试验方法 　　烟草中游离烟碱的测定[5]：称取约1 g样品，放入150 mL的具塞三角瓶中，加入30 mL用0.01 mol/L的NaOH水溶液调节至pH 7.00的去CO2蒸馏水，在室温下振荡萃取0.5 h，过滤，取滤液15 mL至250 mL分液漏斗中，用三氯甲烷（含内标： 正十七烷）萃取2次，每次20 mL，合并有机相，作为气相色谱分析。采用内标-工作曲线法对气相色谱鉴定出的游离烟碱进行定量。 　　1.3 响应曲面（RSM） 试验设计 　　1.3.1 单因素试验 按文献[5]考察液料比、提取时间、提取温度和摇床转速等因素对游离烟碱提取率的影响。 　　1.3.2 响应面分析法试验设计 根据笔者前期试验[5]，选取液料比、提取时间、提取温度和摇床转速为关键影响因子， 采用Box-Behnken设计，因子水平及编码见表1。以游离烟碱得率为评价指标。数据分析及模型建立由Design Expert （Version 7.1.3）软件完成。该模型利用最小二乘法拟合响应值与自变量之间的关系方程： y=B0+B1x1+B2x2+B3x3+B4x4+B12x1x2+B13x1x3+B14x1x4+B23x2x3+B24x2x4+B34x3x4+B11x12+B22x22+B33x32+B44x42，式中：y为响应值， B0为常数项，B1、B2、B3、B4分别为线性系数，B12、B13、B14、B23、B24、B34为交互项系数，B11、B22、B33、B44为二次项系数。 　　2 结果与分析 　　2.1 单因素试验结果 　　通过单因素试验结果可知，当液料比为30∶1、时间为30 min、温度为40 ℃、摇床转速为200 r/min时，游离烟碱的提取效果较好。 　　2.2 响应面分析试验结果 　　2.2.1 多元二次方程的建立 根据单因素的液料比、提取时间、提取温度和摇床转速4个单因素试验结果，确定响应面试验各因素的水平范围。采用Design-Expert软件为辅助手段设计响应面试验，选用Box-Behnken模型（BBD）设计进行了29组试验，其结果见表2。 　　2.2.2 模型方程的建立与显著性检验 　　利用Design-Expert7.1.3软件，通过表2中游离烟碱提取率试验数据进行多元回归拟合，获得游离烟碱提取率对编码自变量液料比、提取时间、提取温度和摇床转速的二次多项回归方程： 　　y=6.77+