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响应面法优化超声辅助法提取昆仑雪菊色素工艺研究 　　[摘要] 以昆仑雪菊干燥头状花序为试验材料，利用响应面法优化超声辅助提取昆仑雪菊色素的条件，分别考察提取温度、超声时间、液料比及溶剂浓度对提取效率的影响。实验表明昆仑雪菊色素以黄酮类成分为主，色素提取液在紫外-可见光区最大吸收波长为380 nm。在单因素实验基础上，进行4因素3水平的响应面分析实验，优化条件为提取温度70 ℃、超声时间60 min、液料比32.05∶1 mL?glt;supgt;-1lt;/supgt;、溶剂浓度为72.25%的乙醇，在此条件下昆仑雪菊色素提取液的吸光度为0.936，与模型预测值接近，方程拟合良好，适于对昆仑雪菊色素提取工艺进行回归分析和参数优化。 　　[关键词] 昆仑雪菊;超声波;响应面设计法;色素 　　[收稿日期] 2014-09-01 　　[通信作者] 郭巧生，Tel/Fax： （025E-mail：gqs@njau.edu.cn;李维林，Tel/Fax：（025E-mail：lwlcnb@mail.cnbg.net 　　双色金鸡菊Coreopsis tinctoria Nutt.属于菊科金鸡菊属，原产于美国中西部地区，目前在我国新疆部分地区大面积栽培，干燥头状花序入药，称为昆仑雪菊，冲泡后茶汤呈绛红色，维吾尔语“古丽恰尔”[1-3]。昆仑雪菊具“破血疏肝，解疔散毒”，作为茶饮亦可清热解毒、降脂降压[4] 。昆仑雪菊舌状花瓣鲜艳肥厚，管状花瓣色深适合提取无毒副作用，甚至具有药理保健功效的天然色素[5-7]。 　　响应面法自20世纪70年代应用于食品药品工业以来[8]，常被应用于确定食品药品中各成分作用和各成分所占比例、利用响应面设计法（RSM）优化反应条件[9]，响应面设计法是可靠的实验设计以及分析方法，因此本实验采用该方法优化昆仑雪菊色素提取工艺，为将来昆仑雪菊深加工提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　昆仑雪菊采自新疆维吾尔自治区昌吉市，经南京农业大学郭巧生教授鉴定为菊科植物两色金鸡菊C. tinctoria 的头状花序。95%乙醇（化学纯）购于南京化学试剂有限公司。 　　1.2 仪器与设备 　　FZ-102型植物粉碎机（武汉格莱莫检测设备有限公司）;DK-S26型电热恒温水浴锅（上海精密实验设备有限公司）;KQ250B型超声仪（昆山市超声仪器公司）;FA1104（1/1万，上海精科天平）;756CRT型紫外-可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）。 　　1.3 方法 　　1.3.1 超声波辅助提取昆仑雪菊色素工艺流程 昆仑雪菊干燥头状花序，粉碎，过60目筛，超声波辅助浸提，抽滤即得色素样品。 　　1.3.2 色素提取液吸收波长及稀释倍数的确定 天然色素提取物中存在大量非色素成分，中国食品添加剂标准规定用吸光度表示[10]。取0.25 g干燥雪菊药材粉末，30 mL 70%乙醇超声提取45 min后抽滤，取1 mL提取液分别稀释至0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6单位浓度，在300～600 nm波段扫描确定色素提取液的最大吸收波长[11]。 　　1.3.3 超声辅助提取法与传统浸提法提取效果的比较 准确称取0.10 g昆仑雪菊粉末，以70%乙醇为提取溶剂，分别采用传统浸提法和超声辅助法进行色素提取。考察昆仑雪菊在不同提取方法条件下色素提取效率的差异[12]。 　　1.3.4 超声辅助提取昆仑雪菊色素单因素试验 准确称取0.10 g昆仑雪菊粉末，以70%乙醇为提取溶剂。考察不同超声波水浴温度（40，50，60，70，80 ℃）、超声波处理时间（15，30，45，60，75 min）、液料比（20∶1，30∶1，40∶1，50∶1，60∶1 mL?glt;supgt;-1lt;/supgt;）及浸提剂浓度（50%，60%，70%， 80%，95%）对提取效率的影响。 　　1.3.5 响应面优化超声辅助提取昆仑雪菊色素试验 在单因素实验基础上，采用响应面法中Box-Behnken的中心组合试验设计原理，以吸光度为响应值，通过响应曲面分析进行提取条件的优化，并运用Design-Expert 8.0 软件设计并分析得到最优提取条件。 　　2 结果与分析 　　2.1 昆仑雪菊色素提取液波段扫描图 　　采用超声波辅助提取法，在70 ℃、液料比30∶1 mL?glt;supgt;-1lt;/supgt;的条件下，昆仑雪菊色素提取液在380 nm处有最大吸收峰，同时采用传统浸提法提取昆仑雪菊色素提取液在380 nm处也有显著吸收峰，因此380 nm为雪菊色素提取液的最大吸收波长（图1），本实验在测定提取液吸光度时，应在此波长条件下