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响应面法优化枣果三萜酸提取工艺研究 　　摘要：以‘鲁枣1号’为试材，采用响应面法优化枣果三萜酸的提取工艺条件。结果表明，枣果三萜酸提取最佳工艺为乙醇浓度70%、料液比1∶26、提取温度65℃、超声30 min、提取3次，枣果三萜酸含量为0.76 mg/g。 　　关键词：响应面法；枣；三萜酸 　　中图分类号：S665.109.9文献标识号：A文章编号：1001-4942（2018）04-0120-05 　　Abstract The response surface method was adopted to optimize the extraction conditions of triterpenic acids from Luzao 1 fruits. The results showed that the optimum conditions were as follows： the concentration of ethanol was 70%， the material-liquid ratio was 1∶26， the extraction temperature was 65℃，the ultrasonic extraction time was 30 min and extracting times were three. The content of triterpenic acids was 0.76 mg/g under such conditions. 　　Keywords Response surface method； Jujube； Triterpenic acids 　　枣（Ziziphus jujuba Mill.）是集食用、药用和保健为一体的传统滋补佳品和药食同源果品。枣果中富含多类生物活性物质，其中有机酸含量较高，目前已从枣果中分离鉴定出33种有机酸，以三萜酸类为主，其次为齐墩果酸、桦木酸、熊果酸等[1-3]。研究表明枣果中的三萜酸能够诱导肿瘤细胞凋亡，降低谷丙转氨酸和谷草转氨酶活性，起到抗肿瘤、保肝作用，同时具有较强的消炎抑菌作用[3-5]，是枣果中一类重要的生物活性物质。中国拥有世界99%的枣树栽培面积和产量，又是世界唯一的枣出口国，因此枣三萜酸的开发与利用具有绝对的市场优势和广阔的发展前景。 　　安全高效提取是枣三萜酸得以深入开发与利用的基础。响应面法可以用较少的试验量有效、快速地确定多因素系统的最佳条件，该方法常用于优化食品中各种生物活性物质的综合分离工艺条件[6，7]。因此，本试验以自主选育的枣树新品种‘鲁枣1号’为试材，采用响应面法优化枣三萜酸的提取工艺，以期为枣三萜酸的开发利用奠定理论基础、提供技术支撑。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　供试材料‘鲁枣1号’为山东省果树研究所自‘金丝小枣’中选育出的极早熟鲜食品种，于2011年通过国家林木品种审定委员会审定。2015年7月，于山东省果树研究所枣资源圃摘取‘鲁枣1号’全红枣果1 kg，带回实验室，用清水冲洗干净，切片，用液氮研磨成粉末状，放入-20℃冰箱中待用。 　　乙醇、高氯酸、香草醛、冰醋酸均为分析纯，天津市凯通化学试剂有限公司产品；齐墩果酸标准品，中国科学院成都生物研究所提供。 　　FA135S型电子分析天平、UV-1600型紫外可见分光光度计，上海精密仪器仪表有限公司产品；TH-100BQX型超声波清洗机，济宁天华超声电子仪器有限公司产品。 　　1.2 标准曲线的制备 　　精密称取熊果酸标准品25 mg于25 mL容量瓶中，加入无水乙醇溶解并定容，得到1 mg/mL标准母液。分别吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL标准母液置于10 mL试管中，沸水浴挥干，依次加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL 和高氯酸0.8 mL，摇匀，60℃水浴15 min，冷却至室温，用冰醋酸定容至刻度，混匀，置于550 nm吸光度下进行比色，测定其吸光值。以齐墩果酸含量为横坐标、吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。通过线性拟合得到回归方程Y=0.0885X+0.0534，R2=0.990 7。 　　1.3 样品液的制备与测定 　　准确称取枣粉1 g，置于50 mL三角瓶中，按一定的乙醇浓度、料液比、提取温度、超声30 min，提取3次，合并提取液。量取样品液0.3 mL，置于10 mL试管中，挥干，按1.2步骤进行反应，在550 nm处测定吸光值，根据标准曲线计算枣果中三萜酸含量。 　　1.4 单因素试验设计 　　称取枣粉1 g，分别固定乙醇浓度为60%、料液比为1∶20、温度为60℃、提取时间为30 min中的3个因素，分别考察第4个因素中乙醇浓度（40%、50