地枫皮组织培养获得再生植株研究.docVIP

地枫皮组织培养获得再生植株研究 　　摘要：采用组织培养快繁技术培养地枫皮种苗，为人工栽培提供优良地枫皮种苗。以地枫皮的茎段、顶芽作为外植体，用不同的培养基进行诱导培养获得丛生芽，进而生根获得再生植株。结果表明，地枫皮初代诱导较好的培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA；培养基MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT+0.3 mg/L NAA较有利于丛生芽继代增殖，增殖系数为3.2；培养基1/2MS+1.0 mg/L IAA较适宜诱导地枫皮无菌芽的生根；在适宜的基质上移栽，地枫皮种苗成活率为70%。得出的方法具有不受季节和地点限制、繁殖系数较高等优点，随着研究不断深入，技术不断完善，将为地枫皮种苗繁育提供技术支持。 　　关键词：地枫皮；组织培养；丛生芽；生根 　　中图分类号：Q943.1 文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）09-0087-03 　　收稿日期：2015-03-09 　　基金项目：广西科学研究与技术开发计划（编号：桂科2-21）；广西医疗卫生重点科研课题（编号：重2012115、重200908）；广西壮族自治区卫生厅中医药科技专项（编号：GZBZ14-14）；广西自然科学基金重点项目（编号：2011GXNSFD018037）。 　　作者简介：李小泉（1968―），男，广西全州人，硕士，副研究员，从事植物组织培养研究。E-mail：1941243276@。 　　通信作者：李林轩，助理研究员，从事中药资源保护与开发利用研究。E-mail：starry1125@。地枫（Illicium difengpi K.I.B.et K.I.M.）别称钻地风、追地风、山八角，地枫皮为其干燥树皮，为木兰科八角属珍稀濒危药用植物[1]。地枫皮主要分布于广西靖西、天峨、都安、马山、龙州等县的岩溶石山山顶，为广西的特有中药材[2-3]，其茎皮、根皮具有祛风除湿、行气止痛等功效，常用于治疗风湿痹痛、气滞腹痛、妇人经期腹痛等症状，治疗效果好，药用价值高，为多种中成药的主要原材料[4]。地枫皮生境分布范围狭窄，生长缓慢，且药用部位为茎皮与根皮，因此采收后植株也无法成活。目前地枫皮药用资源来源于野生自然资源，由于地枫皮种子皮较薄，干燥时种子的油脂会变质，过湿时又容易腐烂，极易丧失发芽能力，加上其生长所需的石灰岩土壤稀少，无法为地枫皮种子的萌芽提供适宜的环境，造成地枫皮繁殖能力弱。随着地枫皮药用需求量不断增加，野生自然资源不断减少，在很多地区濒临灭绝或已绝迹，1999年地枫皮被批准为国家Ⅱ级重点保护野生植物[1]。目前对地枫皮的研究主要集中在资源调查[3]、真伪鉴别[5]、分子标记[6]、化学成分[7]、药理作用[8]等方面，在种苗培育方面还未见报道。因此，本研究通过对地枫皮进行组织培养研究，以期为地枫皮人工栽培提供大量优良种苗，对于保护地枫皮野生种质资源和维护生态系统多样性具有重要意义。 　　1材料与方法 　　1.1供试材料 　　采集广西药用植物园大棚内盆栽的地枫皮，剪取健壮无病虫害植株的茎段、顶芽为外植体。 　　1.2试验方法 　　1.2.1外植体灭菌及培养条件将地枫皮茎段、顶芽用洗洁精水浸泡10 min，用清水冲洗15 min，滤干水后在超净工作台中用75%乙醇浸泡30 s，用无菌水清洗1次；在0.1%HgCl2溶液中浸泡5～12 min，用无菌水冲洗3次，每次浸洗3 min，用无菌滤纸吸干外植体表面水分后，接种于诱导培养基中。培养条件为培养温度（25±3） ℃、光照时间12 h/d、光照度1 500～2 000 lx。培养基中含2%蔗糖、5%琼脂，pH值5.8～62。 　　1.2.2初代诱导培养基筛选初代诱导以MS为基本培养基，添加不同浓度的植物生长调节剂，诱导培养基分别为：0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA（A1处理）、1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA（A2处理）、1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA（A3处理）、2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA（A4处理）。最佳基本培养基的筛选：将诱导得到的无菌芽分别接入上述试验中获得的最佳生长调节剂组合的MS、B5、N68、VW、N6、ER基本培养基中，观察其生长状况。 　　1.2.3继代增殖培养以初代诱导培养试验为基础，考察植物生长调节剂对地枫皮丛生芽的影响，设计激素种类和浓度组合为：1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA（B1处理）、2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT+0.3 mg/L NAA（B2处理）、1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L ZT+0.