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基于SSR标记中国西瓜地方品种资源遗传多样性分析 　　摘要：利用16对多态性SSR引物分析了52份中国西瓜地方品种的遗传多样性。共扩增出42种基因型，基因型数2～5种不等，平均2.63个，平均多态性信息量（PIC）为0.31，变化范围为0.16～0.47。52个品种遗传相似系数为0.288～1.000，平均0.652，在相似系数0.69处，供试品种可分为6大群。品种的聚群与地理来源和地理环境关系不大。 　　关键词：西瓜；地方品种；SSR；遗传多样性 　　中图分类号： S651.03 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）09-0061-03 　　地方品种是指未经现代育种技术改良修饰，仅在长期栽培过程中由自然和人工选择形成的农家品种。中国西瓜地方品种在20世纪50、60年代被广泛种植，通常表现田间生长旺盛，稍难坐瓜，果型大，成熟晚，皮厚，种子大，含糖量低，可溶性固形物含量仅6%～9%，品质较差。但地方品种对属地自然条件、栽培传统具有高度适应性，拥有丰富的遗传变异，也具有一些有益于品种改良的优良性状，如特殊的抗性、生态适应性、优良品质性状等，是现代生物学和育种研究的重要基因资源，也是西瓜品种选育的基本材料，生产上应用的许多优良西瓜品种都是从本地种质材料中选育出来的。有关我国西瓜地方品种的研究较少，主要集中在田间农艺性状和生物学特性考察方面。尚建立等以我国西瓜、甜瓜种质资源中期库内1 200份西瓜种质为材料（包含了我国绝大部分地方西瓜资源），通过2～3年的数据对果实重量、果肉颜色、中心糖、种子千粒质量等12项主要植物学性状进行了遗传多样性和相关性分析[1]。朱金英等对山东德州西瓜地方品种喇嘛、三白果实可溶性糖、维生素C、可滴定酸的积累规律进行了研究[2]，陶士会等则对这2个品种苗期耐低温特性进行了研究，发现三白、喇嘛SOD、POD、CAT和APX酶活性始终高于对照品种京欣1号，表明三白、喇嘛西瓜品种幼苗在低温胁迫下具有更强的细胞膜保护能力[3]。本研究拟利用核心SSR标记对我国部分西瓜地方品种资源进行遗传多样性和亲缘关系分析，以期为我国地方西瓜资源的科学评价和高效利用奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　试验材料均来自国家西瓜甜瓜种质资源中期库，共计52份（表1）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 DNA提取 每份材料取20粒种子， 破壳催芽后置于装有细沙的培养盒中，在25 ℃人工发芽箱中培养10 d，CTAB法提取新鲜嫩叶的基因组DNA。 　　1.2.2 SSR引物筛选 以23对西瓜核心SSR引物和7对核心扩展引物，以及笔者所在课题组开发的2对EST-SSR作为候选引物，由上海博彩生物科技有限公司合成。 　　1.2.3 PCR扩增及电泳 扩增反应体系的总体积为10 μL，含有1 μL 10×PCR buffer、0.8 μL 2.5 mmol/L dNTP、0.1 μL 的Taq DNA 聚合酶（5 U/μL）、10 μmol/L的正反引物各0.5 μL 和20 ng模板DNA。扩增反应程序为：94 ℃预变性4 min；94 ℃变性20 s，55 ℃复性20 s，72 ℃延伸90 s，35个循环；72 ℃延伸5 min。扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染染色，拍照并记录结果。 　　1.2.4 数据统计与分析 统计分子量在100～320 bp的条带，相同迁移位置有带记为1，无带记为0。多态性信息量（polymorphism information content）PIC值的计算公式：PIC=1-∑fi2，其中fi为i位点的基因频率。先根据扩增结果计算引物的等位位点数及频率，然后利用软件计算PIC值。采用NTSYS-pc V 2.10软件进行聚类分析SimQual程序求Jaccard 相似系数，SHAN程序中的UPGMA（未加权平均法）进行聚类分析，并通过Treeplot模块生成聚类图。 　　2 结果与分析 　　2.1 SSR标记多态性分析 　　从参试的32对候选引物中选择稳定性强、具多态性的16对引物用于品种DNA指纹分析（表2）。 　　16对多态性引物共扩增出42种基因型，基因型数2～5种不等，平均2.63个，平均多态性信息量（PIC）为0.31，变化范围为0.16～0.47。以引物 BVWS00433 最高，引物BVWS02433最低（表3）。 　　2.2 聚类分析结果 　　根据16对引物扩增数据，采用UPGMA法进行聚类分析，建立树状聚类图（图1）。 　　供试品种间遗传相似系数为0.288～1.000，平均0.652，阿拉克孜外（6）和小籽葫芦（7）相似系数最小，黑皮（27）和温岭西瓜（41）、 梨皮（13）和钢皮（16）、阜阳1号