利用酯合成测定脂肪酶活性.PDF

2002-14304-01 分析方法分析方法 分析方法分析方法 页页 1:4 页页 利用酯合成测定脂肪酶活性， PLU(Propyl-Laureate Synthesis，丙基月桂酸脂合成) 标准方法标准方法 SOP No: f-9600369.02/02 标准方法标准方法 1. 适用范围 本方法应用酯合成原理测定固定化脂肪酶的活性。 2. 原理 固定化脂肪酶能利用 1-丙醇酯化月桂酸，生成丙基月桂酸脂。通过毛 细管气相色谱测定生成的丙基月桂酸脂和消耗的月桂酸的量计算脂肪 酶的活性。 3. 单位定义 在标准反应条件下每分钟生成 1 μmol 的丙基月桂酸脂所需的酶的量 为一个单位，用 PLU 表示。 4. 反应条件 温度： 60°C 反应时间： 20 分钟 W ： 0.030 g 催化剂干底物 M： 各 40 000 μmol 1-丙醇和月桂酸 水合剂： 3 ％w/w 的水 5. 化学试剂 月桂酸（99%，Merck art.no.808333） 1－丙醇（99.5，Merck art.no.997） 去离子水 庚烷（99%，Merck） 丙基月桂酸脂（99%，Sigma ） 6. 仪器 带紧扣瓶盖的 20 ml 的玻璃试管（7.5 ×2 cm 直径），或带塞的 100 ml 锥型烧瓶振动式热水浴（150 rpm） 7. 月桂酸-丙醇底物 例如：10 个样品的底物 1-丙醇……………………………………24.0 g 月桂酸 ……………………………………80.1 g 水 …………………………………………3.2 g 将水溶入 1-丙醇中，在加热的状态下（保持在约 50°C ）慢慢加入月 桂酸溶解。底物保存在 60°C 下，每个样品取用 10.73 g。 8. 反应 振荡水浴保温在 60°C ±2°C。将相应的干物质约为 30 mg 的催化剂 页页 2:4 页页 标准方法标准方法 SOP No: f-9600369.02/02 标准方法标准方法 称入到小瓶中，然后加入 10.73 g 的底物。将小瓶盖紧，立即放入到水 浴中，开始计时。 20 分钟后将小瓶移出水浴，从上清液中取出 5 μl，用 995 μl 庚烷稀 释。每个样品需做平行样。