薄层色谱参数比移值.PPT

第3节 薄层色谱分离检测技术 二、薄层色谱参数 2．相对比移值 3．分离度 三、仪器与材料 2．载板 3．展开容器 4．显色剂 5．显色装置 6．检视装置 四、操作技术 操作方法 将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵中沿同一方向研磨混匀，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒入涂布器（见图8-14）中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(涂层厚度为0.2mm～0.3 mm)，取涂好的薄层板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30分钟，立即置于有干燥剂的干燥器中备用 。 2．点样 3. 展开 2．鉴别 4．定量方法 第4节 纸色谱分离技术 2．展开剂 三、操作技术 3．展开 4．斑点定位 纸色谱法斑点的定位基本和薄层色谱法相似，但纸色谱法不能使用腐蚀性显色剂，也不能在高温下显色。 运用纸色谱进行药物的鉴别、检查和含量测定的方法、要求与薄层色谱法一致 第5节 应用案例 案例8-3 甲苯咪唑中有关物质检查 一、分离原理 薄层色谱是一种开放性色谱，是将混合组分样品溶液点在薄层板一端的起始线上，点样处称为原点，在密闭容器中用适宜的流动相（薄层色谱法中又称为展开剂）展开。因吸附剂对不同组分的吸附能力不同，展开剂对不同组分的解吸能力也不完全相同，造成各组分在薄层析上移动的速度有快有慢，经过一段时间展开后，不同的组分彼此分开，最终形成相互分离的斑点 薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC) 将固定相均匀平铺在光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法 可分为吸附、分配、分子排阻色谱法等 1．比移值 (1）定义 组分迁移的距离与展开剂迁移的距离之比 (2)计算方法 (1）定义 指被测组分的比移值与参照组分的比移值之比 (2）计算方法 (3）特点 消除系统误差， 值的重复性和可靠性都比 好 （1)定义 衡量薄层色谱分离效果的重要指标，是指相邻两斑点中心至原点的距离之差与两斑点平均径向宽度（径向宽度是指斑点沿着展开方向的宽度）的比值 (2）计算方法 1．吸附剂 粒径 5~40 硅胶 聚酰胺 微晶纤维素 氧化铝 硅藻土 常用 硅胶H 硅胶G 硅胶GF254 硅胶HF254 想一想 H、G、F各代表何种意思？试解释硅胶HF365？ 玻璃板 塑料膜 金属箔 厚度 2mm 规格 5cm×20cm 10cm×10cm 10cm×15cm 10cm×20cm 种类 要求 表面光滑、平整清洁 玻板处理措施 清洁剂或铬酸洗液浸泡洗涤，用清水充分清洗，再用蒸馏水或去离子水冲洗，表面应不附水珠，晾干备用 3．点样器 手动 全自动点样仪 定量毛细管 平口微量注射器 平底色谱专用展开缸 双槽薄层色谱专用展开缸 红褐色或棕红色 喷雾或浸渍 含酚羟基化合物 三氯化铁-铁氰化钾试液 紫色或黄色 喷雾或浸渍 氨基酸类 茚三酮试液 蓝色 喷雾烘干 醛等还原性物质 磷钼酸乙醇溶液 多数显黄棕色 薰蒸 多数有机化合物 碘 多数加热后呈黑色 喷雾加热 多数有机化合物 浓硫酸乙醇溶液 斑点颜色 显色方法 适用范围 显色剂 喷雾瓶 浸渍槽 蒸气熏蒸 ----双槽展开缸 紫外分析仪(三用) 摄像设备 薄层色谱扫描仪(CS9301型） 1．薄层板制备 自制薄层板 市售薄层板 无黏合剂 分类 含黏合剂 10%～15%煅石膏 0.2%～0.5%羧甲基纤维素钠水溶液 操作方法 普通薄层板(玻璃、聚酰胺薄膜和铝基) 高效薄层板（固定相粒径为5~7 ） 分类 操作方法 临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板和聚酰胺薄膜可根据需要剪裁 手动涂布器 普通板 点样基线----距底边2.0cm 圆点状----　R≤3mm 条带状-----宽度5～10mm 点或条带间距----＜8mm 点样量---- ＜10 高效板 点样基线----距底边0.8~1cm 圆点状----　R≤2mm 条带状-----宽度4～8mm 点或条带间距----＜5mm 点样量---- ＜5 （1）展开要求 查阅 A.何为边缘效应?何因？如何防止? B.展开剂加入量?展开剂展开距离？ （2）展开方式 上行 近水平 双向 多次 上行展开 近水平展开 4．检视 有色物质斑点----目光检视 无色物质斑点 荧光检出法 化学检出法 五、检测技术 1．系统适用性试验 检测灵敏度 比移值 分离效能 等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽 等体积混合法----斑点单一、紧密 结构相似对比法-----Rf不同或两斑点