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大黄属药用植物抗HIV1活性谱效关系研究 　　[摘要] 目的：分析大黄属药用植物的超高效液相色谱法（UPLC）特征图谱与抗HIV-1活性之间的相互关系。方法：采用HIV-1 逆转录酶相关的核糖核酸酶H活性测定检测了大黄属16种22个样品的抗HIV-1活性；同时测定了22个样品的UPLC特征图谱；运用数理统计方法研究谱效相关性；并采用UPLC-TOF-MS/MS指认样品主要成分峰。结果：藏边大黄、苞叶大黄和河套大黄提取物有较好的抗HIV-1活性。谱效相关性研究表明4.74，7.99，21.18 min色谱峰与活性有一定相关性。结论：通过谱效研究，推测了有抗HIV-1活性的大黄属药用植物及其活性组分，为大黄属植物深层次的研究开发奠定了基础。 　　[关键词] 大黄；特征图谱；抗HIV-1活性；谱效关系 　　传统中药和药用植物来源的天然化合物具有结构多样性、毒性较低、来源广泛等特点， 因而在防治艾滋病方面有着独特的优势和巨大的潜力[1]。近年来，大黄被列为中西医防治AIDS各种机会性感染的有效药物之一[2]。有研究表明一些蒽醌类化合物有体外抗HIV-1的活性[3]；且大黄素衍生物能够抑制HIV-1聚合酶和整合酶的活性[4]。蓼科大黄属植物是我国最为重要的药用植物资源类群之一，同时也是天然蒽醌化合物的主要植物来源；因此筛选有抗HIV-1活性的大黄属植物并深入研究其活性成分十分有意义。 　　本研究采用大黄属植物对HIV-1逆转录酶相关的核糖核酸酶H活性的抑制作用为评价指标，研究其UPLC特征图谱与药效之间的相互关系，以期表征大黄属植物的抗HIV-1活性成分。 　　1 材料 　　美国Waters公司Acquity超高效液相系统，包括二元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、PDA 全波长检测器以及Waters Empower2 数据处理工作站。KQ5200E型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。1/10 万电子分析天平（ AL204型，梅特勒-托利多公司） 。 　　乙腈为色谱纯（Honeywell BJ Brand，德国），流动相用水为超纯水，其余试剂为分析纯。本实验中样品均为实地采集，经中国科学院植物研究所李安仁教授鉴定。所有样品都保存于中国医学科学院药用植物研究所。样品详细信息见表1。 　　2 方法与结果 　　2.1 大黄属植物提取物的制备 　　精密称取样品5.0 g（量少者取3.0 g），放置于100 mL三角烧瓶中，加入10倍量纯净水（50/30 mL），加热至微沸，维持1 h，取出放冷。5 000 r·min-1离心15 min，分离样品及提取液。样品继续加入10倍量纯净水，加热提取1 h，离心分离提取液及样品。合并2次的提取液，加入等体积的纯净水。-80 ℃条件下冷冻24 h，经冻干处理制成粉末状提取物。 　　2.2 大黄属植物提取物抗HIV-1逆转录酶相关的核糖核酸酶H活性研究[5-6]HIV-1逆转录酶相关的核糖核酸酶H活性测定采用50 μL反应体系：50 mmol·L-1 Tris-HCl，pH 8.0，2 mmol·L-1二硫苏糖醇，100 mg·L-1牛血清白蛋白，50 mmol·L-1氯化钾，8 mmol·L-1氯化镁，4 nmol·L-13H标记底物poly（dC）-[3H]poly（rG），1 nmol·L-1逆转录酶。37 ℃孵育30 min后，40 μL反应液点在Whatman玻璃纤维滤纸GF/A上，测定三氯乙酸沉淀的放射性。大黄属样品抑制核糖核酸酶H活性测定使用poly（dC）-[3H]poly（rG）混合物做反应底物，缓冲液体系按操作说明使用，三氯乙酸沉淀的放射性按上述条件测定；结果采用酶活性被抑制一半时化合物的浓度IC50表示，见表1。结果表明，DH2，4，6，14，15，16，19，21的IC50≤0.3 mg·L-1，活性较好；DH1，3，5，7，9，13，18，22的IC50在0.6～0.9 mg·L-1，活性次之；DH8，10，11，12，17，20的IC50≥1 mg·L-1，活性较差。 　　2.3 大黄属植物UPLC特征图谱研究 　　2.3.1 色谱条件 Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；温度30 ℃；流速0.3 mL·min-1；进样1 μL；检测波长280 nm；流动相甲醇（A）-0.1%乙酸水（B），梯度洗脱；0～3 min，4%～22% A；3～5 min，22%～27% A；5～6 min，27%～32% A；6～15 min，32%～52% A；15～19 min，52%～75% A；19～21 min，75%～85% A；21～23 min，85%～100% A。