核酸分子杂交-幻灯片.pptVIP

核酸分子杂交 Section I 核酸分子杂交技术的基本原理 有互补特定核苷酸序列的单链DNA或RNA混在一起时，其相应同源区段将会退火形成双链结构。 如把一段已知基因（DNA或RNA）核酸序列用合适标记物（如放射性同位素、生物素等）予以标记，当作探针（probe), 与变性后的单链DNA或RNA进行杂交。 再用合适方法（如放射自显影或免疫组织化学等技术）把标记物检测出来，就可确定靶核苷酸序列是否存在、拷贝数及表达丰度等。 第 二 节 一、Southern Blot 毛细转移 真空转移 电转移 二、Northern Blot 四、 斑点及狭缝杂交 五、原位杂交 （in situ hybridization） 第 三 节 生物芯片 第 四 节 一、 合成寡核苷酸探针注意原则 (1) 长度（10-50 bp); (2) G:C对含量40%-60%； (3) 探针内避免互补； (4) 避免同一碱基连续出现； (5) 与非靶序列有70%以上同源性或连续8个以上碱基序列相同，最好不用。 (1)标记前后探针基本结构、化学性质相同; (2)特异性强、本底低、重复性好； (3)操作简单、节时； (4)安全、无环境污染。 2 、标记物的种类 32P、35S、3H、125I等 第 五 节 影响杂交的因