Tollip基因敲除对压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚及心功能影响的分析-心血管内科专业论文.docxVIP

华中科技大学硕 士学 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 中文摘要 目的：通过主动脉缩窄术建立压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚模型，以 WT 小鼠和 Tollip 基因敲除小鼠为研究对象，探讨 Tollip 在心肌肥厚中的作用。 方法：选取 8-10W，23.5-27.5g 的雄性野生型小鼠（Wild Type， C57BL/6 背景）、Tollip 基因敲除小鼠（Tollip K nock O ut，C57BL/6 背景）为实验对象，随机分为两组并施以 主动脉缩窄术（aortic binding，AB）和假手术（SHAM）。术后 4 周首先运用超声心 动图和血流动力学评价心脏结构和心功能。取材称量体重（Body Weight）、心脏重量 （Heart Weight）、肺脏重量（Lung Weight）、量取胫骨长度（Tiba Length）并计算 心脏重量与体重的比值（HW/BW）、心脏重量与胫骨长度比值（HW/TL）和肺脏重 量与体重的比值（LW/BW）。病理学检测观察心肌细胞横截面积及心脏间质和周围 血管胶原纤维。Real-timePCR 检测心肌肥厚标志物（ANP、BNP、β-MHC）及心肌纤 维化标志物（Collagen Iα、CollagenⅢ、CTGF）mRNA 水平。Western blot 方法检测心 肌肥厚信号通路分子的蛋白水平，免疫共沉淀检测蛋白与蛋白的相互作用。 结果：压力负荷诱导的心肌肥厚模型中，与 WT 小鼠相比，Tollip KO 表现为：1、心 肌肥厚程度增加：心脏重量增加，HW/BW、HW/TL 和 LW/BW 比值增加；心肌细胞 横截面积，心肌细胞体积增大，伴心肌肥厚标志物转录水平升高；2、心功能恶化： 心室壁厚度增加，射血分数、短轴缩短率、dp/dt max、dp/dt min 降低；3、心肌纤维 化程度增加：心肌间质和周围血管间质的胶原纤维增多，纤维化标志物的 mRNA 水 平升高；4、相关信号通路的改变：心脏组织中 AKT 及其下游分子 GSK3β 磷酸化水 平上调，同时在 HEK293T 工具细胞中，Tollip 能与 AK T 相互作用。 结论：Tollip 能通过与 AKT 相互作用抑制 AKT-GSK3β 信号通路的激活从而减轻 压力负荷诱导的心肌肥厚模型小鼠的心肌肥厚及心肌纤维化的程度，改善心功能。 关键词：Tollip；心肌肥厚；纤维化；心功能，AKT Abstract Aims: We bulid pressure over-load induced cardiac hypertrophy animal model by aortic banding operation in wild-type mice and Tollip gene knock out mice to investigate the potential effect of Tollip in cardiac hypertrophy. Methods: We selected male C57BL/6 mice (Wild Type) and Tollip gene knockout mice ( Tollip KO, C57BL/6 background) with age from 8 to 10 weeks old and weight from 23.50g to 27.5 g for our experiments. All mice were seperated into two groups, which were subjected to aortic banding(AB) and Sham sugery(SHAM). After 4 weeks, we performed echocardiography and hemodynamic to assess interventricular thickness and cardiac function. We dissected the hearts and the lungs, and weighed to compare the heart weight/body weight（HW/BW）, heart weight/tibia length（HW/TL）and lung weight/body weight LW/BW ） ratios. Pathological examination were performed to observe cross-sectional area of cardiac myoctes, cardiac interstitial