VPA联合As2O3对NB4细胞血管新生相关因子表达的影响-肿瘤学专业论文.docxVIP

中 中 文 摘 要 PAGE PAGE 10 VPA 联合 As2O3 对 NB4 细胞血管新生相关因子表达的影响 摘要 目的： 三氧化二砷（As2O3）是治疗对维A酸耐药的复发急性早幼粒细胞白 血病的有效、安全的药物，完全缓解（CR）率高，其药理主要作用于 PML/RARa融合蛋白，是通过诱导分化和促使癌细胞凋亡而达到治疗的目 的。但是临床上As2O3存在早期诱导分化阶段白细胞数急剧增长，白血病 细胞的浸润增加了病人治疗的危险性。有学者认为白血病细胞浸润现象与 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)有关，VEGF 是调节血管生成的最重要的细胞因子，VEGF和它的受体(Flt-1)结合刺激 肿瘤血管内皮细胞形成新生血管，与多种肿瘤的生长、转移、预后有关。 基质金属蛋白酶（matrix metal proteinases, MMPs）是一系列蛋白水解酶， 在肿瘤侵袭和复发过程中发挥着重要作用，MMP-9通过降解Ⅳ型胶原酶 促进细胞外基质重塑并破坏基底膜以促进血管形成，MMP-9能够上调 VEGF的表达。Survivin 基因是近年发现的一种抑制凋亡新基因，属于凋 亡蛋白抑制家族（inhibitor of apoptosis protein, IAP）成员，在肿瘤的发生、 发展过程中起到了重要作用。丙戊酸钠（valproic acid, VPA）是临床上广 泛应用的广谱抗癫痫药，可阻滞肿瘤细胞的细胞周期并诱导肿瘤细胞凋 亡，促进肿瘤细胞自我吞噬。近年来发现其可通过阻碍血管生成而达到治 疗肿瘤的目的。本实验探讨VPA联合不同浓度As2O3对t(15,17)APL细胞株 NB4细胞血管新生相关因子表达的影响。 方法： NB4细胞培养，实验分不同浓度的As2O3即0、0.1、0.5、1.0、2.0μmol/L 及不同浓度As2O3联合VPA共10组，利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测 细胞毒性反应，采用RT-PCR方法检测细胞VEGF/Flt-1、MMP-9及Survivin mRNA的表达。Western Blot方法检测VEGF及Survivin蛋白的表达。 结果： 1 不同处理组对NB4细胞株存活率的影响 MTT结果显示，单用As2O3组随着As2O3浓度的增加，细胞存活率依次 降低,差异具有显著性（P0.05）；而As2O3联合VPA组均较单用As2O3组细 胞存活率下降，经统计学分析差异具有显著性（P0.05）;不同浓度As2O3 联合VPA组间进行统计分析（P0.05）差异无统计学意义。 2 不同浓度AS2O3对NB4细胞VEGF基因及蛋白表达的影响 2.1 经半定量RT-PCR分析， 0.1、0.5、1.0μmol/L As2O3组与对照组 相比VEGF mRNA表达增强，差异有统计学意义（P0.05）。2.0μmol/L As2O3 组与对照组相比 VEGF mRNA 表 达 降 低 ， 差 异 有 统 计 学 意 义 （P0.05）。 2.2 经Western-Blot检测发现，0.1、0.5、1.0μmol/L As2O3组与对照组 相比VEGF蛋白表达增强，差异有统计学意义（P0.05）。2.0μmol/L As2O3 组与对照组相比VEGF蛋白表达降低，差异有统计学意义（P0.05）。 3 不同浓度AS2O3对NB4细胞Flt-1基因表达的影响 经半定量RT-PCR分析， 0.1、0.5、1.0μmol/L As2O3组与对照组相比 Flt-1 mRNA表达增强，差异有统计学意义（P0.05）。2.0μmol/L As2O3组 与对照组相比Flt-1 mRNA表达降低，差异有统计学意义（P0.05）。 4 不同浓度As2O3对NB4细胞MMP-9基因表达的影响 经半定量RT-PCR分析，0.1、0.5、1.0μmol/L As2O3组与对照组相比 MMP-9 mRNA表达增强，差异有统计学意义（P0.05）。2.0μmol/L As2O3 组与对照组相比MMP-9 mRNA表达降低，差异有统计学意义（P0.05）。 5 VPA联合As2O3与单用As2O3对NB4细胞VEGF基因及蛋白表达的影 响 5.1 经半定量RT-PCR分析，VPA联合不同浓度As2O3组与单用As2O3 组比较VEGF mRNA表达均降低，差异有统计学意义（P0.05）。 5.2 经Western-Blot 检测发现， VPA联合不同浓度 As2O3 组与单用 As2O3组比较VEGF蛋白表达均降低，差异有统计学意义（P0.05）。 6 VPA联合As2O3与单用As2O3对NB4细胞Flt-1基因表达的影响 经半定量RT-PCR分析，VPA联合不同浓度