VPA和TSA诱导白血病细胞系分化的研究-儿科学专业论文.docxVIP

四川大学顿士学位论文 英文缩略词表 YPA valproic acid TSA trichostatin ATRA all trans-retinoic acid HATs histone acetyl transferase HDACs histones deacetylases HDAC1s histone deacetylases inhibitors APL acute promyelocytic leukemia) AML acute myeloid leukemia HEPES hydroxyethyl piperazine ethanesulfonic acid 丙戊酸 曲古抑菌素 全反式维甲酸 组蛋白乙默化酶 组蛋白去乙llIt化酶 纽蛋白云乙M化酶抑制剂 急性早幼粒细胞白血病 急性髓细胞样自血病 控乙基赈嚓乙磺酸 1C50 FCM 50% inhibition of growth flow cytometry 半数抑制浓度 流式细胞术 MTT 3-(4，5D- imethyl-2-thi缸。lyl)-2，5-dlphenyl-2H-tetrazolium bromide Methylthiazoletetrazolium 3-(4，5)-二甲基-2-噬瞠-(2，5)- 二苯基澳化囚氮瞠蓝 NBT nitroblue tetrazolium 硝基兰囚氨哇 TPA 12-0-tetraecaboyl--phorbo 13-acetate 佛波酶 DMSO PI Dimathyl sulfoxide propidium iodide 二甲亚研L 腆化丙晓 因J 因J 11大学硕士学位论文 2 2 VPA 和 TSA 诱导自胞系分化的研究 研究生刘衡 导师符仁义教授 中 组蛋白去乙融化酶抑制剂 C Histone deacety!出e inhibitors HDACIs) 近年来被用于白血病的分化治疗研究，然而由于大多数 HDAC 抑制剂体 内生物利用度低，临床要求较大的药物剂量才能达到有效的血浆去乙默 化酶抑制浓度，因此易导致明显的毒副作用，限制了临床应用。亘庄重 CVa!proic acid VPA) 是广谱的抗癫痛药物，在有效治疗剂量下，病人耐 受良好，无明显毒副作用。最近， VPA 被证实具有强大的 HDAC 抑制作 用，研究表明 VPA 对多种转化细胞 (Transforrned cel1s)具有诱导分化的作 用。短链脂肪酸类化合物能诱导红系祖细胞表达胎儿血红蛋白， VPA 能 否在临床耐受剂量范围内诱导白血病细胞分化或调亡呢?我们选用人类 早幼粒细胞臼血病和人类红白血病细胞系 K562 作模型，研究并探讨了 VPA 和另一种组蛋白酶去乙酸化酶抑制剂曲亩抑菌素 (TSA)对人类早 幼粒细胞白血病细胞系皿 -60 以及人类红白血病细胞系 K562 的抗肿瘤 效应。 目的1) 观察 VPA、TSA 对 HL-60 和 K562 细胞的增殖抑制和促 分化作用。 2) 观察全反式维甲酸是否与 VPA 和 TSA 具有协同作用。 3) 观察 VPA 和 TSA 是否具有诱导 K562 细胞向成熟红系分化的能力。 方法 细胞在给予不同浓度的单剂或联合用药后，每隔 24/)、时计数 活细胞数，连续4天，绘制细胞生长曲线。 2) 联苯肢染色，瑞氏染色， 非特异性酶酶染色，硝基囚氮瞠盐 CNBT)还原试验4种染色方法，观察 四川大学硕士学位论文 四川大学硕士学位论文 PAGE PAGE 3 HL-60 与K562 细胞的诱导分化情况。 3) 软琼脂平板克隆试验。计数 ((50 cells)集落形成数。 4) 不同浓度的VPA处理后第3. 5天，流式细胞仪检测 细胞表面抗原CDllb和CD33表达情况。 5) 培养3天后PI (腆化丙吸)染 色，流式细胞检测不同处理组细胞凋亡率。 6)琼脂糖J疑胶电泳观察有无 DNA片断化。 7) 比较VPA、TSA处理组旦旦旦比值和对照组旦旦旦比 A(MTT) A(M1T) 值的差别。 结果串串皿-60细胞显示了对VPA和TSA剂量依赖和时间依赖的生 长抑制: VPA在体外培养体系中 4饨. 72h. 96h对HL-60细胞的半数抑制 浓度 (IC5o ) 分别为 117.69μ g!mI 、99.17μ g!ml、7 1.7μ g!ml ，TSA在体 外培养体系中48h. 72h. 96hX才HL-60细胞的(IC50 ) 分别为 15.89 ng!mI、 11.75 n归l、7.96n归1 。静皿-60经VPA处理后在软琼脂平板中集落形 成能力降低: VPA (100μ g!m!). ATRA (lO飞的.VPA ClO