STARS在棕榈酸诱导的肌细胞胰岛素抵抗中的作用-内科学(内分泌与代谢病)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………5 英文缩写…………………………………………………………………10 研究论文 STARS 在棕榈酸诱导的肌细胞胰岛素抵抗中的作用 前言…………………………………………………………………11 材料与方法…………………………………………………………12 结果…………………………………………………………………28 附图…………………………………………………………………30 讨论…………………………………………………………………40 结论…………………………………………………………………42 参考文献……………………………………………………………43 综述 胆汁酸与代谢综合症的研究进展………………………………45 致谢………………………………………………………………………54 个人简历…………………………………………………………………55 中 中 文 摘 要 STARS 在棕榈酸诱导的肌细胞胰岛素抵抗中的作用 摘 要 随着国民经济的快速发展和生活水平的提高，我国 2 型糖尿病的发病 率逐年升高，而 2 型糖尿病合并的心脑眼肾等器官的慢性并发症，往往导 致其高死亡率和高致残率，严重威胁人类健康。胰岛素抵抗是 2 型糖尿病 的重要的发病机制，但其具体机制尚不清楚，而高脂是诱发胰岛素抵抗的 重要危险因素。 Rho 信号横纹肌激活剂（the striated muscle activator of Rho signalling， STARS）,它是一种肌动蛋白结合蛋白，在心肌，骨骼肌和平滑肌特异性 表达，主要与肌节的 I 蛋白和肌丝结合。近年来有研究发现 2 型糖尿病患 者以及糖耐量正常但有胰岛素抵抗的一级亲属其骨骼肌中 STARS 表达增 加并与胰岛素敏感性呈负相关，而且高脂饮食喂养的小鼠骨骼肌 STARS 表达也增加，并且能用胰岛素增敏剂罗格列酮纠正。下调 STARS 表达后 骨骼肌葡萄糖的摄入增加。这些都表明 STARS 可能与胰岛素抵抗的发生 有关。 血浆反应因子（Serum response factor，SRF）是一个重要的细胞转录 调控因子，主要存在于 3 种组织-心肌、骨骼肌和平滑肌。研究发现 2 型 糖尿病患者以及糖耐量正常但有胰岛素抵抗的一级亲属其骨骼肌 SRF 调 节的基因表达增加，而且 SRF 抑制剂 CCG-1423 能够改善高脂饮食喂养 小鼠的糖耐量。巨核细胞白血病因子 1（megakaryoblastic leukemia 1 ， MKL1）是一种单项调节的辅因子，也是 STARS 激活 SRF 的一个重要的 辅助因子。 SRF 、MKL1 是 STARS 的下游因子，在 STARS 的许多生物 学作用中发挥着重要作用。STARS 是否通过 MKL1 或 SRF 进而导致胰岛 素抵抗尚不清楚。 本课题采用棕榈酸孵育 L6 成肌细胞构建胰岛素抵抗模型，并通过质 粒上调和 siRNA 下调肌细胞中 STARS 的表达，研究 STARS 在骨骼肌胰 岛素抵抗中的作用以及其下游信号通路。 目的：研究 STARS 在棕榈酸诱导的肌细胞胰岛素抵抗中的作用及其 机制。 1 PAGE 2万方数据 PAGE 2 万方数据 方法： 1 培养及诱导分化大鼠 L6 成肌细胞，将成肌细胞分化成骨骼肌细胞，并 用棕榈酸（PA）孵育，建立胰岛素抵抗模型。实验分组如下，上调 STARS 表达的实验分组：对照组（control），空质粒组（pcDNA），STARS 过表 达组（pcDNA/STARS），棕榈酸组（PA），棕榈酸空质粒组（PA+pcDNA）， 棕榈酸 STARS 过表达组（PA+pcDNA/STARS）；下调 STARS 表达的实验 分组：对照组（control），siRNA 阴性对照组（NC-siRNA），STARS 敲低 组（ si-STARS ）， 棕 榈 酸 组 （ PA ）， 棕 榈 酸 siRNA 阴 性 对 照 组 （PA+NC-siRNA），棕榈酸 STARS 敲低组（PA+si-STARS）。通过 RT-PCR 及 Western 方法检测 STARS mRNA 及蛋白表达水平，确定转染成功后， 用葡萄糖氧化酶法测定各组细胞的葡萄糖摄取率评价胰岛素的敏感性。采 用 RT-PCR 和 Western-blot 方法分别检测 SRF、MKL1，以及胰岛素信号 通路中 AKT、IRS-1、及 GLUT4 的 mRNA 和蛋白表达水平，多样本比较 采用单因素方差分析，两样本间比较采用 t 检验。 结果： 1 L6 成肌细胞成功分化 与未分化的 L6 成肌细胞