Tau蛋白与实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经轴索损伤的相关性研究-神经病学专业论文.docxVIP

致 谢 29 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果31 个人简历 32 山西医科大学硕士学位论文 山西医科大学硕士学位论文 I I Tau蛋白与实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经轴索损伤 的相关性研究 摘 要 目的： 研究非磷酸化和磷酸化两种不同形式 tau 蛋白在实验性自身免疫性脑脊髓炎 （EAE）小鼠脑组织轴索中不同时期动态变化及意义。 方法： 将 72 只体重 18g~20g 购自北京维通利华实验动物有限公司年龄为 8 周~10 周的 C57BL/6 雌性小鼠随机分为 6 组,每组 12 只。按免疫第 14 天、25 天、50 天瘫痪程度 不同分别定义为急性期、瘫痪期、缓解期小鼠，将 6 组依次编为 EAE 急性期组、EAE 瘫痪期组、EAE 缓解期组、对照急性期组、对照瘫痪期组、对照缓解期组。在免疫 第 14、25、 50 天，将 每组小鼠 12 只随机 分为两组，每 组 6 只。按 每只小鼠需 MOG35-55100ug 计算出 36 只小鼠共需 MOG 量。将稀释为 3mg/mlMOG 与等体积 CFA 混合,再加入一定量的结核分枝杆菌素,以刺激免疫，将此液体混合物放入针头注射器 中反复抽吸，直至混合物呈现浑浊样改变。在 EAE 组小鼠脊柱两侧多点注射乳剂， 每只注射总量 0.3ml，并在免疫第 0 天、第 2 天每只腹腔注射 500ng 百日咳毒素,作为 免疫增强剂。对照组每只小鼠给予与实验组等量生理盐水注射作为对照。从免疫当日 起,对小鼠进行每日评分，直至小鼠处死前，评分采用国际通用 5 分评分标准。对小 鼠脑组织进行固定、包埋，用 HE 染色观察组织炎症变化，用免疫组化方法观察不同 时期轴索 tau 蛋白含量变化；用 ELISA 法测量小鼠血清中 GSK3 浓度。 结 果： 1.小鼠国际通用5分评分法,小鼠逐渐出现以下情况，尾部无力，由于食欲减退出 现皮毛光泽下降；病情逐渐加重出现双后肢肌张力降低及小脑功能受损出现步态不 II II 稳，但不影响其日常运动；小鼠表现为双后肢无力加重，影响日常运动，被动翻身后 不能恢复，但刺激后可挪动；小鼠表现为双后肢完全瘫痪，同时前肢出现肌力减弱； 小鼠表现为无任何肢体运动，不能完成进食，但无死亡小鼠。免疫缓解期四肢无力较 前缓解。神经功能评分随时间推移达到高分后，当疾病进入缓解期时评分下降。2. 对照组脑组织急性期、瘫痪期未见明显异常，缓解期组可见生理性轴索萎缩。EAE 组急性期脑组织可见炎症细胞呈血管套样浸润；瘫痪期除可见大量炎症细胞浸润外， 出现白质结构松散、组织空泡化；缓解期炎症细胞浸润量有所下降，但遗留轴索萎缩。 3.阳性轴索表现为肿胀、深染，纵切面呈梭形节段状，横切面呈点状，节段状轴索分 节计数，计数轴索阳性数，对照急性期组、瘫痪期组、缓解期组轴索内磷酸化tau蛋 白表达数分别为4.09±1.09、5.82±1.32、7.55±1.62；EAE急性期组、瘫痪组、缓解 期磷酸化tau蛋白表达量28.40±2.60、48.40±3.81、29.42±1.07；EAE瘫痪期组高于 EAE急性期组（P0.01），高于EAE缓解期组（P0.01）。4.将每组各6只小鼠血清 GSK3对比，EAE组较对照组增高，差异具有统计学意义（P0.01），EAE组瘫痪期 较急性期、缓解期水平高（P0.01）。5.EAE组小鼠瘫痪期、缓解期血清GSK3与脑 组织磷酸化Tau蛋白两者间存在线性相关性。 结论： 磷酸化 tau 蛋白含量与小鼠神经功能评分相关。磷酸化 tau 蛋白含量和轴索损害 相关。 血清 GSK3 水平可间接反映小鼠轴索损害情况。 关键词：Tau 蛋白；神经轴索；GSK3；自身免疫性脑脊髓炎 PAGE PAGE III Research for correlation tau protein with nerve axonal injury in experimental autoimmune encephalomyelitis Abstract Objective: Study the phosphorylation and non phosphorylation of two different forms of tau protein dynamic changes of different periods and significance in axon experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). Methods： 72 mice which weight only 18 g ~ 20 g, age 8 ~ 10 weeks of C57BL / 6 female mice what bought fr