TSA联合ATRA对子宫颈癌细胞杀伤的分子机制研究 妇产科学专业论文.docxVIP

安徽医科大学硕士学位论文 英文缩略词表（abbreviations） 英文缩写 英文全称 中文名称 ATRA All-trans retinoic acid 全反式维甲酸 AMP Ampicillin 氨苄青霉素 ANOVA One-way analysis of variance 单因素方差分析 DAB Diaminobenzidime 对氨基联苯胺 DMSO Dimethyl-sulphoxide 二甲基亚砜 HATs Histone acetyltransferases 组蛋白乙酰化转移酶 HDACs Histone deacetylases 组蛋白去乙酰化酶 HDACi Histone deacetylase inhibitors 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 HPV Human papillomavirous 人乳头状瘤病毒 STAT3 Signal transducer and activator of 信号转导和转录激活因子 3 transcription 3 PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 PBS Phosphate buffered salin 磷酸盐缓冲液 TFIIE Transcription factor lE 转录因子 IE TSA Trichomycin A 曲古菌素 A SDS Sodium dodeyl sulphate 十二烷基磺酸钠 VPA Valproic acid 丙戊酸纳 WB Western blotting 蛋白免疫印迹 1 安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 2 TSA 联合 ATRA 对子宫颈癌细胞杀伤的分子 机制研究 研究背景： 中 文 摘 要 子宫颈癌占女性恶性肿瘤的第二位，仅次于乳腺癌，近年来该病的发病呈年 轻化趋势。每年大约有 500000 名妇女被诊断为子宫颈癌，其中 80%来自于发展中 国家，而且有一半患者死于此病。早期子宫颈癌的首选方法目前主要是以手术为 主，但是对于晚期、复发及转移的患者，手术治疗效果较差。同时，晚期宫颈癌 患者因对化疗的耐药，以及体质较差等原因，疗效亦不十分理想。因此，寻找新 的治疗子宫颈癌的方法具有十分重大的意义。 近 年 来 ， 随 着 表 观 遗 传 学 的 研 究 深 入 ， 多 项 研 究 证 实 组 蛋 白 去 乙 酰 化 酶 (histone deacetylases，HDACs)在肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用，且可能 为肿瘤治疗提供靶点。HDAC 抑制剂主要通过诱导参与调节细胞活性的基因表达、 抑制细胞增殖、促进细胞分化和诱导细胞凋亡等多种途径发挥作用杀伤肿瘤细胞。 研究发现子宫颈癌组织中 HDACs 存在过表达，因此 HDACs 可能是治疗子宫颈癌 的一个靶点。曲古菌素 A(trichostatin A, TSA)源自链霉菌代谢产物, 是一种抗 真菌药物使用, 同时也是强大 HDAC 抑制剂。全反式维甲酸（All-trans retinoic acid, ATRA）是一种具有调节细胞生长和分化的药物，其同时具有调控正常上皮细胞的 分化作用。目前的临床实验已表明，ATRA 在子宫颈癌和癌前病变化疗中具有诱导 分化治疗作用。本研究选择子宫颈癌 HeLa 细胞株和 SiHa 细胞株以及荷人宫颈癌 裸鼠模型为治疗对象，研究并探讨了 TSA 联合 ATRA 对子宫颈癌细胞的杀伤作用， 并进一步探讨其相关机制。 目的 研究 TSA 联合 ATRA 对子宫颈癌细胞的杀伤作用，并探讨其分子机制，为子 宫颈癌的治疗提供理论依据和治疗线索。 方法 1.体外实验： (1) 采用 CellTiter 96? AQueous 细胞增殖实验检测不同浓度 TSA 与 ATRA （1μg/mL）联合处理后子宫颈癌 HeLa 及 SiHa 细胞生长抑制率。并根据增殖实验 结果选择对 heLa 和 SiHa 细胞增殖有效抑制的 TSA（500 nmol/L)浓度，将下一步 实验分为四组：对照组、TSA 组、 ATRA 组、TSA+ATRA 组。对照组加入溶媒。 (2) 7-AAD 荧光染色法观察子宫颈癌 HeLa 及 SiHa 细胞形态变化及其凋亡情况。 (3) 采用 Western-blot 方法检测药物处理后子宫颈癌 HeLa 及 SiHa 细胞中 STAT3、 p-STAT3、P53、P21、caspase-3、BCL-2 的表达差异。 (4) 采用流式细胞术（FCM）检测药物处理后子宫颈癌 HeLa 及 SiHa 细胞的凋亡 变化。 2.体内实验： 取人新鲜宫颈癌组织块，移植于 CD1 nu/nu 裸鼠左侧肩胛部皮下，每例接种 5 只小鼠。此为第 1 代荷宫颈癌小鼠