TOB1对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究-临床医学专业论文.docxVIP

TO TOB1 对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究 摘 要 摘 要 目的：本课题通过建立 TOB1 稳定高表达及表达抑制的肺癌细胞株，研究 TOB1 在体外对肺癌细胞增殖、转移、侵袭及放射敏感性的影响，并初步探讨其相关机 制。 方法：采用 RT-PCR 和 Western blot 法检测人类正常支气管上皮细胞 HBE 和八 种肺癌细胞株中 TOB1 表达水平的差异，通过脂质体介导的重组质粒转染及 G418 筛选，建立 TOB1 稳定转染株，同时采用 RNA 干扰法抑制 TOB1 的表达；应用 MTT 实验、流式细胞术、体外划痕及 Transwell 实验研究 TOB1 对肺癌细胞 95-D 和 A549 增殖、细胞周期分布以及转移侵袭的影响。采用 Western blot 和明胶酶谱 实验检测 TOB1 对肺癌细胞中细胞周期和转移侵袭相关蛋白的表达及基质金属蛋 白酶家族(MMPs)活性的影响。采用克隆形成实验、流式细胞术、免疫荧光实验检 测 TOB1 对肺癌细胞电离辐射后克隆形成能力、细胞周期分布及 γ-H2AX foci 形成 数目的影响，同时应用 Western blot 实验检测 TOB1 对肺癌细胞电离辐射后细胞周 期及 DNA 损伤修复相关蛋白表达的调控。采用免疫共沉淀及 Western blot 法初步 探讨其相关机制。 结果：成功构建 TOB1 高表达的 95-D 和 NCI-H1975 细胞稳定株，发现 TOB1 高表达显著抑制 95-D 细胞的增殖、转移及侵袭能力，并引起 95-D 细胞发生明显 的 G1 期阻滞。Western blot 及明胶酶谱实验发现 TOB1 高表达下调 95-D 细胞中周 期相关 Cyclin D1、Cyclin B1、Cyclin E 以及 α-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2、 MMP9 等转移侵袭相关蛋白的表达，同时抑制 MMP2、MMP9 的活性。TOB1 高 表达显著降低 NCI-H1975 细胞的克隆形成能力，降低电离辐射引起的肺癌细胞 G2/M 期阻滞，增加电离辐射引起的 γ-H2AX foci 的数目。Western blot 结果显示 TOB1 高表达降低 DNA-PKcs、Ku70、Ku80、XRCC4 的表达。利用 siRNA 抑制肺 癌 A549 细胞中 TOB1 的表达在增殖、转移及放射敏感性方面与 TOB1 高表达均呈 现相反的表现。免疫共沉淀及 Western blot 实验发现 TOB1 与 PTEN 存在相互结合， 并且 TOB1 影响 EGFR/MAPK 信号通路的活化。 结论：TOB1 在体外参与对肺癌细胞增殖、转移和侵袭能力的调控，并可以影 I PAGE PAGE IV 摘 要 TOB1 对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究 响肺癌细胞的放射敏感性，机制可能与 TOB1 通过与 PTEN 存在相互结合，影响 EGFR/MAPK 信号通路的活化有关。 关键词：肺癌；TOB1；增殖；转移；侵袭；细胞周期；放射敏感性；DNA 损 伤；PTEN；EGFR/MAPK 作 者：孙克康 指导老师：焦 旸 副教授 TO TOB1 对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究 英文摘要 Studies on the effcets and mechanisms of TOB1 on the proliferation, metastasis and radiosensitivity of lung cancer cells Abstract Aim: To investigate the effects of the transducer of erbB-2.1 (TOB1) on the proliferation, metastasis and radiosensitivity of human lung cancer cells in vitro. Methods: TOB1 expression in eight human lung cancer cell lines (95-D, A549, NCI-H1299, NCI-H1975, NCI-H661, NCI-H446, NCI-H1395 and Calu-3) and the normal human bronchial epithelial (HBE) cell line was determined by Western blot and RT-PCR analysis. TOB1-overexpressed cell lines 95-D/TOB1, NCI-H1975/TO