Toll4介导的信号传导通路在肝硬化大鼠细菌移位中的作用-内科学(消化内科学)专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2014 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 1 Toll4 介导的信号传导通路在肝硬化大鼠细菌移位的作用 消化内科 研究生：张驰乾 导师：周力 刘苓 摘要 目的：探索在肝硬化大鼠细菌移位大鼠多脏器 TNF-α 的变化及其与组织损伤的 相关性及大鼠小肠粘膜中 TLR4/ NF-κB P65 表达的变化。 方法：实验大鼠分为正常对照组（NC 组）,BT 阴性组（BT-组）及 BT 阳性组（BT+ 组）；ELISA 法检测各组大鼠回肠、肝、肾、脑、外周血中 TNF-α 含量；HE 染色 评估组织损伤；探讨组织损伤评分与其相应组织及外周血 TNF-α 含量的相关性。 采用免疫组化（Immunohistochemical，IHC）方法检测回肠黏膜组织 TLR 4、NF- κB P65 的表达。 结果：在回肠、肝、脑、外周血中，BT+组的 TNF-α 均较 BT-组显著升高（P 0.05）； 其增高水平与相应组织的损伤程度呈显著正相关。BT+组及 BT-组回肠黏膜组织中 TLR 4 表达均高于正常对照组，有统计学差异（P 0.05），但 BT+组及 BT-组之间 无统计学差异；BT+组回肠黏膜组织中 NF-κB P65 表达均高于正常对照组及 BT- 组，均有统计学差异（P 0.05）； 结论：肝硬化 BT 大鼠局部肠黏膜免疫屏障呈显著活化状态,激活 TLR4/NF-kB 信号传导途径,进而可能参与肝硬化多脏器损伤。 关键词： 肝硬化；细菌移位；肿瘤坏死因子-α；肠粘膜免疫；TOLL 样受体 4; 前言 肝硬化（Liver cirrhosis,LC)是临床常见的慢性进行性肝病。LC早期由于 肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则有多器官系统受累，常出现上消化道出 血、内毒素血症、肝性脑病、肝肾综合征、继发感染、腹水、肝衰竭等多种并发 症。肠道细菌移位（Bacterial Translocation,BT）是指肠道内的微生物及其毒 素，越过肠黏膜屏障侵入肠道以外的组织，如肠壁浆膜、肠系膜淋巴结 、门静 脉以及其他远处器官。现有研究表示肝硬化造成的多器官系统受累与肠道细菌移 位有着重要的关系【1、2】，并指出BT可能是导致全身并发症的根源【3】。 肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)是一种主要由活化 的巨噬细胞和T淋巴细胞分泌的重要促炎因子,出现在炎症反应的早期，可触发细 胞因子网络的级联反应，与多种感染性疾病和免疫性疾病相关。既往研究显示【4 －7】，肝硬化患者及动物模型的BT阳性组，外周血中TNF-α水平较对照组显著升高， 其机制可能在于BT发生后，在细菌及其毒素刺激下，通过TLRs- NF-κB通路激活 免疫细胞，促进促炎因子的产生。同时研究显示【6、7】，TNF-α水平升高与门脉高 压相关， 其机制可能是TNF-a通过诱发内皮细胞生成一氧化氮（nitric oxide, NO)，促进高动力循环状态发生相关。但BT发生后，TNF-α在各器官组织的变化 如何？TNF-α水平变化与组织病理损伤的相关性如何？目前仍不清楚。 Toll 样受体（Toll like receptors,TRLs）是在胃肠道的肠腔内多处表 达的一种天然免疫系统中病原模式识别受体(Pattern Recognition Receptors， PRRs)不仅参与识别病原的分子模式，还诱导与获得性免疫相关的致炎/抗炎因子 及趋化因子分泌等防御作用【8】。在 TLRs 家族中，TLR4 为在肠黏膜处表达最主要 的分型，主要识别革兰氏阴性菌的脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）和热休 克蛋白（Heat Shock Proteins，HSPs）及其保守结构类脂 A 等，研究证实【9、10】 源自肠道的 LPS 可通过 TLR4 引起肠上皮细胞(Intestinal Epithelial Cells, IECs)活化，且 TLR4 表达与 IECs 引起 LPS 的免疫应答存在正相关。TLR4 已被证 实【11】其不仅可以通过髓样分化因子 88（myeloiddifferentiationfactor88,My D88）依赖途径也可以通过非依赖途径来启动天然免疫，而信号通路中重要枢纽 因子核因子（Nuclear factorκB，NF-κB）被认为是一种高度保守的转录因子， 是传导通路中的最终效应分子，其主要的活性形式指 p65/p50 二聚体，只有 p65 的 C 一末端才具有促进转录活性结合位点，从而调控细胞因子的转录水平【12】诱 导细胞因子的产生如 TNF-α,IL-1β等【13】。 HYPERLINK /view/1563313.htm 肠道作为产生全身的炎症反应重要器官之