TSA对人胃癌细胞生物学行为及其RASSF1A基因表达的影响-消化内科专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 RT-PCR reverse transcriptase-polymerase 逆转录聚合酶链式反应 chain reaction SDS TSA TSG sodium dodecyl sulfate Trichostatin A tumor suppressor gene 十二烷基磺酸钠 曲古抑菌素 A 抑癌基因 TSA 对人胃癌细胞生物学行为 及其 RASSF1A 基因表达的影响 中文摘要 目的：通过利用组蛋白乙酰化酶抑制剂 曲古抑菌素 A(TSA)作用于人胃癌细胞系 SGC-7901、MKN-28，研究 TSA 对人胃癌细胞系 SGC-7901 和 MKN-28 细胞生物学 行为及其 RASSF1A 基因表达的影响，初步探讨乙酰化修饰与 RASSF1A 基因在 人胃癌发生中的相关性。 方法：将 0.1μmol/L、0.3μmol/L、1.0μmol/L、3.0μmol/L、10.0μmol/L 不同浓 度的 TSA 分别处理 SGC-7901、MKN-28 人胃癌细胞系 24h、48h、72h，用相差显 微镜动态观察药物处理后的两种胃癌细胞形态学改变；MTT 比色法检测细胞增 殖抑制率；流式细胞仪检测细胞周期及凋亡；RT-PCR、Western blotting 检测 RASSF1A 基因 mRNA 转录和蛋白表达水平变化。设不含细胞组为空白对照组， 不加 TSA 组为阴性对照组。 结果：①倒置相差显微镜细胞形态学观察结果显示，未经 TSA 处理的人胃癌细胞系 SGC-7901 和 MKN-28 细胞呈多边形或梭形，细胞致密，甚至堆积为复层。加入 TSA 后细胞皱缩、变圆，体积变小，排列松散，单层生长，甚至贴壁不良，最 后见大多数细胞变圆脱壁飘浮，且随着 TSA 浓度增高和作用时间延长细胞形态 学改变愈加明显。 ②MTT 比色法检测结果显示，TSA 处理后人胃癌细胞系 SGC-7901、MKN-28 细胞增 殖受到明显抑制，呈时间和浓度依赖性，与阴性对照组相比，差异具有显著性( P 0.05 )。 ③流式细胞术检测结果显示，不同浓度 TSA 作用 SGC-7901 和 MKN-28 细胞不同时 间后，随着时间的延长和药物浓度的增加，SGC-7901 细胞系的凋亡率逐渐增加， 与阴性对照组相比，差异具有显著性( P0.05 )；MKN-28 细胞系的细胞周期明显 改变，滞留在 G1 期的细胞百分率逐渐增高，S 期细胞逐渐减少，与阴性对照组 相比，差异具有显著性( P 0.05 )。 ④RT-PCR 检测结果显示，人胃癌细胞系 SGC-7901、MKN-28 无 RASSF1A 基因 mRNA 转录，经 TSA 处理后 RASSF1A 基因 mRNA 重新转录，而且随着药物浓度的增加和 时间的延长，与阴性对照组相比，差异具有显著性 ( P 0.05 )。 ⑤Western blotting 检测结果显示，人胃癌细胞系 SGC-7901、MKN-28 无 RASSF1A 基 因蛋白表达，经 TSA 处理后蛋白重新表达，而且随着药物浓度的增增加和时间的 延长，表达愈强，与阴性对照组相比，差异具有显著性 (P 0.05 )。 结论：TSA 抑制人胃癌细胞系 SGC-7901、MKN-28 细胞增殖，改变人胃癌细胞系 MKN-28 细胞周期，促进人胃癌细胞系 SGC-7901 细胞凋亡，其机制可能与 RASSF1A 基 因异常乙酰化状态恢复导致基因重新表达有关。 关键词：组蛋白乙酰化酶抑制剂；曲古抑菌素 A；RASSF1A 基因；胃癌 Effects of TSA on the biological behaviour and expression of RASSF1A gene in human gastric carcinoma cell lines Objectives: To study the role of human gastric cancer cell lines SGC-7901 and MKN-28 were cultured in RPMI1640 and treated with different concentrations of TSA for different time, then many inspections and measurements have been done to illuminate the effect of TSA on the biological behaviour and expression of RASSF1A gene in human gastric carcinoma cell lines. Methods: Human g