VDAC2在高位脊髓损伤大鼠心肌细胞线粒体凋亡通路中的作用-麻醉学专业论文.docxVIP

目 录 附录…………………………………………………………………….1 中文摘要……………………………………………………………….2 英文摘要……………………………………………………………….4 前言…………………………………………………………………….6 材料和方法…………………………………...………………………..9 1. 材料9 2. 方法11 3. 指标检测13 3.1 透射电镜下观察心肌细胞损伤情况13 3.2 原位末端标记法（Tunel）检测心肌细胞凋亡率 13 Western blot 方法检测心肌组织中 Bax、Bcl-2 和 VDAC2 的表达 14 RT-PCR 检测心肌组织中 Bax、Bcl-2 和 VDAC2 表达…17 4. 统计学处理21 结果…………………………..…………………………………………22 1. 大鼠高位脊髓损伤后心肌细胞超微结构的变化22 2. 大鼠高位脊髓损伤后心肌细胞的凋亡率24 3. 大鼠高位脊髓损伤后心肌组织中 Bax、Bcl-2 和 VDAC2 蛋白 的水平……………………………………….……………… 27 4. 大鼠高位脊髓损伤后心肌组织中 Bax、Bcl-2 和 VDAC2 mRNA 的水平……………………………………………… 31 讨论……………………………………………..………………………36 结论………………………………………………..……………………40 参考文献……………………………………………..…………………41 综述……………………………………….…….………………………44 致谢………………………………………………………………52 福建医科大学硕士学位论文 福建医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 10 英文缩略词表 中文全称 英文全称 英文缩略词 高位脊髓损伤 spinal cord injury SCI 电压依赖性阴离子通道 2 voltage dependent anion channel 2 VDAC2 钙敏感受体 calcium sensing receptor CaSR 肌酸激酶 creatine kinase CK 肌酸激酶同工酶 creatine kinase isoenzyme CK-MB 肌钙蛋白 细胞外信号调节激酶 己糖激酶 troponin I extracellular signal-regulated kinase Hexokinase TnI ERK HK 摘 要 目的 观察电压依赖性阴离子通道 2（VDAC2）在大鼠高位脊髓损伤后心肌 细胞线粒体凋亡通路中的表达，初步探讨 VDAC2 在高位脊髓损伤后心肌细胞 凋亡中的作用。 方法 健康雄性 SD 大鼠（清洁级）48 只，体重 200~250 g。随机分为八组（每 组 n=6）：假手术对照（TC）组：假手术后 6 h（TC1）、假手术后 12 h（TC2）、 假手术后 24 h（TC3）和假手术后 48 h（TC4）；高位脊髓损伤组（TS）：SCI 损伤后 6 h(TS1)、12 h(TS2)、24 h(TS3)和 48 h(TS4)。采用改良的 Allens 打击 法，建立高位脊髓损伤大鼠模型，假手术组只暴露脊髓，不进行打击。剪取 SD 大鼠心尖部心肌组织，使用透射电镜观察心肌细胞的形态学特征；通过原 位末端标记法（Tunel 法）检测心肌细胞的凋亡率；采用 Western blot 法检测 心肌组织 Bax、Bcl-2 和 VDAC2 蛋白的水平，RT-PCR 法测定 Bax、Bcl-2 和 VDAC2 mRNA 的表达。 结果 ①透射电镜结果显示 TC 组各时点大部分心肌细胞细胞膜完整；肌原纤 维、肌丝排列整齐，清晰可见；线粒体结构完整，未见空泡样变性和肿胀；闰 盘结构正常，糖原颗粒丰富，心肌损伤情况明显比 TS 组同时相轻。②Tunel 结果显示 TS 组较 TC 组存在明显的细胞凋亡(P 0.01)。③Western blot 和 RT-PCR 结果相同，显示 TC 组 Bax、Bcl-2 和 VDAC2 均有表达，各时相点间 差异无统计学意义；TS 组 Bax 表达增高，以 TS3 为著，各时相点与 TC 组比 较差异均有统计学意义(P 0.05)；TS 组 Bcl-2 表达量于损伤后第 6 h、12 h、 24 h 下降，损伤后第 48h 表达量恢复，各时相点与 TC 组比较差异均有统计学 意义(P 0.05)。同时，TS 组 Bax/Bcl-2 比值增高，TS 组与 TC 组比较差异均 有统计学意义(P 0.05)。TC 组 VDAC2 有较高水平表达，TS 组 12 h、24 h、 48 h 表达受抑制，与 TC 组比较，差异均有统计