VIP对树突状细胞胃癌抗原呈递中相关分子表达影响的体外研究-内科学(消化系病)专业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 研究背景： 胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，胃癌细胞如何逃逸机体的免疫尚不清楚。 既往的研究提示，胃癌细胞可以分泌免疫抑制激素血管活性肠肽 (vasoactive intestinal peptide,VIP)，那么是否 VIP 可以抑制树突状细胞（dendritic cell, DC） 抗原呈递过程中相关分子的表达呢？如此，胃癌细胞就可以通过分泌 VIP，抑制 DC 对胃癌抗原的呈递，从而抑制机体对其的免疫清除。为此，我们设计了此实 验。目前树突状细胞疫苗用于胃癌的免疫治疗是研究热点。DC-SIGN（CD209） 是 DC 表面 C 型凝集素受体（C-type lectin receptor,CLR）家族中最重要的受体， 参与肿瘤的免疫逃逸。既往的研究提示恶性肿瘤包括胃癌中具有免疫抑制作用 的 VIP 的含量和 Ii 链（invariant chain,Ii 链,CD74）的表达增加，因此，胃癌细 胞可能通过分泌 VIP 来调节 DC-SIGN（CD209）和 Ii 链（CD74）的表达起到对 DC 的免疫抑制作用从而参与了胃癌的免疫逃逸。 目的： 观察与胃癌细胞共孵育时 VIP 对 DC 的 DC-SIGN（CD209）和 Ii 链（CD74） 的表达，及 MHC-Ⅱ与协同共刺激分子 CD40、CD80、CD86 的表达变化，初步 分析 VIP 对 DC 的免疫抑制作用及其与胃癌免疫逃逸的关系。 方法： 严格无菌采集南昌大学第一附属医院健康剖宫产孕妇志愿者脐带血，用密 度梯度离心法得到脐带血单个核细胞（cord blood mononuclear cells,CBMC），贴 壁的单个核细胞 在 含 细胞因子 -- 重组 人粒细胞 - 巨噬细胞集落刺激因子 (recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor, rh GM- CSF)、重组人白细胞介素 4(recombinant human interleukin-4,rh IL-4)的完全培养 基中联合刺激诱导成为未成熟的树突状细胞（immature dendritic cell,imDC），第 5 天加入重组人肿瘤坏死因子(recombinant human tumor necrosis factor,rh TNF-α) 刺激树突状细胞成为成熟的树突状细胞（mature dendritic cell, mDC）。第 10 天将 II 收获 mDC 分别及联合与胃癌细胞、VIP 和 DC-SIGN（CD209）的天然配体甘露 聚糖 Mannan 孵育，树突状细胞为对正常照组，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR 方法）及免疫细胞化学法检测 DC 对 DC-SIGN、Ii 链、MHC-Ⅱ及协同共刺激分 子 CD40、CD80 CD86 的 mRNA 和蛋白的表达变化，分析与胃癌细胞共孵育时 VIP 对 DC 表面胃癌抗原呈递相关分子等各免疫分子表达的影响，最终评估其在 胃癌免疫逃逸中的作用。 结果： 1、随着诱导培养时间的延长，树突状细胞 DC-SIGN（CD209）、Ii 链（CD74）、 MHC-Ⅱ及协同共刺激分子 CD40、CD80、CD86 的表达量越多，第 10 天 DC 的 各指标表达量显著高于第 8、9 天（p0.05），后两者无显著差异（p0.05）。 2、mDC 表面表达 VIP 受体 VPAC1，而不分泌 VIP。 3、各组中 DC-SIGN（CD209）、Ii 链（CD74）、MHC-Ⅱ及协同共刺激分子 CD40、CD80、CD86 的 mRNA 与相应蛋白表达相一致。 人胃癌细胞株 MKN45 可以从 mRNA 及蛋白水平上抑制树突状细胞以上指标的表达，与 MKN45 共孵 育且有 VIP 的存在时更进一步从 mRNA 及蛋白水平上抑制树突状细胞以上指标 的表达，且这种抑制作用不能被 Mannan 所逆转。 4、DC-SIGN（CD209）与 Ii 链（CD74）、MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD86 的表达呈正相关。DC-SIGN（CD209）的下调从而抑制树突状细胞的抗原提呈能 力，免疫应答水平受抑制。 结论： 在与胃癌细胞共孵育时 VIP 可以下调 mDC DC-SIGN（CD209）与 Ii 链 （CD74）、MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD86 分子的表达，抑制其抗原提呈能力， 从而参与胃癌的免疫逃逸。 关键词：VIP；树突状细胞；胃癌细胞；MKN45；协同共刺激分子；免疫逃 逸；RT-PCR；免疫细胞化学 III Ab Abstract ABSTRACT Background: Gastric cance