Twist在胃癌中的表达及其与上皮间质转化的关系-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

安徽医科 安徽医科大学硕士学位论文 1 1 英文缩略词表 Abbreviation 英文缩写 英文全称 中文全称 Twist twist protein 扭曲蛋白 Stat3 Signal transducers and 信号转导子和转录激活子 3 activatorsof transcription 3 E-cad E-cadherin E-钙黏蛋白 N-cad DAB N-cadherin diaminobenzidine N-钙黏蛋白 3,3’-二氨基邻苯胺 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 EMT FITC Epithelial mesenchymal transition fluorescein isothiocyanate 上皮间质转化 异硫氰酸酯荧光素 GC gastric cancer 胃癌 HE HRE hematoxylin and eosin hypoxia reactor element 苏木素－伊红 缺氧反应元件 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应 IFA IHC immunofluorescence assay immunohistochemistry 免疫荧光分析 免疫组织化学 MOD mean optical density 平均光密度值 bp cDNA base pair complementary DNA 碱基对 互补 DNA mRNA messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 NBS PBS newborn bovine serum phosphate buffer saline 新生牛血清 磷酸盐缓冲液 P probability 概率 SABC μl Strept Avidin-Biotin Complex microlitre 链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物 微升 PAGE PAGE 2 Twist 在胃癌中的表达及其与 EMT 的关系 中文摘要 第一部分 胃癌中 Twist、Stat3 的表达及其与 EMT 的关系 目的：研究扭曲蛋白(Twist)、信号转导子和转录激活子 3(Stat3)、上皮间质转化 相关因子(E-cad)在胃癌组织及癌旁组织中的表达差异，分析三者与胃癌临床病理 参数之间的相关性；分析 Twist、Stat3 与 E-cad 的相关性；探讨 Twist、Stat3、E-cad 的表达在判断胃癌患者预后中的意义。 方法：采用免疫组织化学方法链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法检测手术切除胃 癌组织及癌旁标本中的 Twist、Stat3、E-cad 表达差异，分析其与胃癌患者年龄、 性别、肿瘤的组织学类型、转移及 TNM 分期等参数的关系。 结果：在胃癌组织中 Twist、Stat3、E-cad 的阳性率分别为 57.3%、64.7%、12%， 癌旁组织中的阳性率分别为 17.3%、10.8%和 68%，肿瘤组织中的表达与癌旁组织 差异均有统计学意义。Twist 的表达在肿瘤远处转移、淋巴结转移、TNM 分期和浸 润深度间差异均有统计学意义(P ＜0.05～P ＜0.01)；Stat3 的表达在肿瘤淋巴结转 移、浸润深度及 TNM 分期间差异均有统计学意义(P ＜0.05～P ＜0.01)。Twist、 Stat3 表达与 E-cad 表达均呈明显负相关关系(P ＜0.01)。 结论：胃癌组织中 Twist、Stat3 表达与肿瘤的生物学特征均有一定关系，Stat3 的 激活可能会增强 Twist、E-cad 的表达，检测 Twist、Stat3、E-cad 对预测肿瘤侵袭 转移、判断预后具有一定价值。 关键词：胃肿瘤 信号转导子和转录激活子 3 扭曲蛋白 上皮间质转化 第二部分 沉默 Twist 基因表达对胃癌 BGC-823 细胞株 生物学行为的影响 目的：利用 RNAi 干扰人胃癌细胞株 BGC-823 中 Twist 基因表达，观察细胞的生 物学行为的改变，分析干扰前后细胞株中上皮间质转化相关因子 E-cad、N-cad 的 表达的变化， 初步探讨 Twist 在胃癌上皮间质转化现象中的作用及其临床应用价 值。 方法：根据 Genbank 中报道的 Twist 基因核苷酸序列，参考 siRNA 设计原则针对 Twist 序列设计干扰片段并构建其表达载体 psilencer3.1-Twist 重组质粒，将其瞬时 导入人低分化胃腺癌细胞株 BGC-823 细胞中，RT-PCR 检测 Twist、E-cad、N-cad mRNA 的表达，细胞免疫荧光检测细胞骨架蛋白 F-actin 的表达，Transwell 小室检 测细胞侵袭转移能力的改变