Twist促进乳腺癌细胞能量代谢重塑的作用及相关机制研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

重庆医 重庆医科大学博士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 APS Ammonium persulfate 过硫酸铵 BCA Bicinchoninic acid 2,2- 联喹啉 -4,4- 二甲 酸二钠 cDNA Complementary deoxynucleic acid 互补脱氧核糖核酸 CMV Cytomegalovirus 巨细胞病毒 CT Cholera toxin 霍乱毒素 DMEM Dulbecco’s modified Eagle’s medium 达尔伯克氏改良伊格 尔氏培养基 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 ECL Enhanced chemiluminescence 增强化学发光 EGF Epidermal Growth Factor 表皮生长因子 EMR Energy metabolism reprogramming 能量代谢重塑 EMT Epithelial-mesenchymal transition 上皮间质转化 ENO1 α-Enolase α-烯醇化酶 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 G6PD Glucose-6-phosphate Dehydrogenase 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 HRP Horseradish Peroxidase 辣根过氧化物酶 LHDA Lactate dehydrogenase A 乳酸脱氢酶 A mRNA Messenger RNA 信使 RNA mTOR Mammalian target of rapamycin 哺乳动物类雷帕霉素 靶蛋白 PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS Phosphate belanced solution 磷酸盐缓冲液 PGK1 Phosphoglycerate kinase 1 磷酸甘油酸激酶 1 1 PKM2 Pyruvate kinase M2 M2 型丙酮酸激酶 PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 PVDF Polyvinylidene difluoride 聚偏氟乙烯 qRT-PCR Quantitative real-time polymerase chain reaction 定量即时聚合酶链锁 反应 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 siRNA small interfering RNA 小分子干扰 RNA SRC-1 Steroid receptor coactivator 类固醇受体辅活化因 子 STAT3 Signal transducer and activator of transcription 3 信号转导与转录激活 因子 3 TEMED Tetramethyl ethylenedamine 四甲基二乙胺 TPI1 Triosephosphate isomerase 1 磷酸丙糖异构酶 1 Tris Tris(hydroxymethyl)aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 2 Twist 促进乳腺癌细胞能量代谢重塑的作用及相关机制 研究 摘 要 目的：研究 Twist 对乳腺癌细胞能量代谢重塑的作用，以及能量代 谢重塑对乳腺癌细胞迁移能力及 EMT 的影响，并进一步阐明其内在的 分子作用机制，旨在为靶向肿瘤代谢的乳腺癌治疗策略提供新的理论 基础。 方法：体外培养 MCF10A-Twist 和 MCF10A-Vector 细胞，经常氧 （21% O2）和低氧（1% O2）分别处理 1 h、3 h、6 h、12 h 后：采用葡 萄糖测定试剂盒检测葡萄糖的消耗率；采用乳酸测定试剂盒检测乳酸 的生成率；Mito-Tracker green 探针法检测线粒体质量；透射电镜法检 测线粒体的形态和数量。构建 Twist 基因干扰慢病毒载体，并建立稳定 敲除 Twist 基因的 MCF10A-Twist-sh-Twist 细胞系和 BT549-sh-Twist 细 胞系：检测葡萄糖消耗率及乳酸生成率；Mito-Tracker green 探针法检 测线粒体质量。利用生物信息学手段对本课题组前期的 MCF10A-Twist 和 MCF10A-Vector 的 mRNA 芯片和蛋白组学数据进行分析，筛选出能 量代谢相关的差异基因；挑选差异基因进行 qRT-PCR 验证；Western Blot 检测关键基因在常氧（21% O2）及低氧（1% O2）条件下的表达情况； Western Blot 检测敲除 Twist 基因后关键基因的表达变化情况。We