WISP2基因过表达对食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 1 WISP2 基因过表达对食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响 中文摘要 目的：探讨 WISP2 基因过表达对食管癌细胞生物学功能的影响及可能涉及的分 子机制。 方法：分别构建 WISP2 基因过表达质粒和含空质粒载体的阴性对照组，使用 Lpofectamin2000 瞬时转染低分化食管癌细胞 E109，利用实时荧光定量 PCR （Quantitative real-time PCR,qPCR）和蛋白印记（Western blot, WB）技术在基因 及蛋白水平检测 WISP2 在 E109-WISP2 组（转染组）、E109-空质粒组（转染空 质粒组）和 E109-空白组（未转染 WISP2 质粒组）的表达；应用 CCK8 检测 WISP2 基因过表达前后细胞的增殖能力变化、Transwell 小室和 Matrigel 基质胶检测 WISP2 基因过表达前后细胞侵袭、迁移能力的变化；qPCR、Western blot 技术检 测各组细胞 ERK-1/2、Slug 和 E-cadherin 的 RNA 和蛋白的表达水平的变化。 结果：瞬时转染 E109-WISP2 组中 WISP2 基因 mRNA 表达(66.07±12.34)与 E109- 空 质 粒 组 (1.17 ± 0.09) 和 E109- 空 白 组 相 比 明 显 升 高 ， 差 异 具 有 统 计 学 意 义 （P0.05），而 E109- 空质粒组和 E109-空白组 WISP2 基因表达无明显差异 （P0.05）；E109-WISP2 组中 WISP2 蛋白表达水平与 E109-空质粒组及 E109- 空白组相比明显升高，和两对照组相比差异有统计学意义（P0.05）。CCK8 法 检测结果显示 E109-WISP2 组(0.225±0.003)与 E109-空质粒组(0.26±0.003)及 E109-空白组(0.26±0.001)相比增殖能力明显降低，和两对照组相比差异有统计 学意义（P0.05），而 E109-空质粒组和 E109-空白组无明显差异（P0.05）； Transwell 小室侵袭实验显示 WISP2 过表达后食管癌细胞穿透 Matrigel 基质胶的 细胞数（26.60±4.81），显著低于 E109-空质粒组（53.20±4.32）及 E109-空白 组(56.00±4.90)，差异具有统计学意义（P0.05）；而 E109-空质粒组和 E109- 空白组相比无明显差异（P0.05）。Transwell 小室迁移实验显示 WISP2 过表达 后癌细胞通过聚碳酸酯微孔滤膜的细胞数（55.20±4.52），显著低于 E109-空质 粒组（95.5±4.79）及 E109-空白组(99.60±5.78)，差异具有统计学意义（P0.05）； 而 E109-空质粒组和 E109-空白组相比无明显差异（P0.05）。 qPCR 及 Western blot 检测结果显示 E109-WISP2 组细胞与 E109-空质粒组和 E109-空白组相比， ERK-1/2、Slug 表达降低，而 E-cadherin 表达升高。 结论：WISP2 基因的过表达能明显降低食管癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力； WISP2 基因过表达能降低 ERK-1/2、Slug 的表达及提高 E-cadherin 的表达；WISP2 基因可能通过调节 ERK1/2 的表达抑制食管癌细胞的增殖能力；通过调节 Slug 和 E-cadherin 的表达抑制食管癌细胞的侵袭和迁移能力。 [关键词] 食管癌细胞，WISP2，增殖；侵袭；迁移 Effect of WISP2 gene overexpression on the proliferation, invasion and migration of esophageal cancer cells Abstract Objective: To explore the effect and the potential mechanism of WISP2 gene overexpression on proliferation, invasion and migration of esophageal cancer cells. Methods: The plasmid containing WISP2 gene and control were transient transfection into esophageal cancer cell line E109 by Lpofectamin2000, respectively. WISP2 o