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VEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞治疗兔激素性股骨头缺血性坏死-外科学专业论文.docx

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VEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞治疗兔激素性股骨头缺血性坏死-外科学专业论文

宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 中文摘要 - - PAGE 3 - 宁夏医科大学学位论文独创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进 行研究工作所取得的成果,无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明 引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品 成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式 标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名 论文导师签名 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明 宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文,同意学校按规定向国家有 关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权宁 夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公 布(包括刊登)论文的全部或部分内容。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名 论文导师签名 年 月 日 年 月 日 VEGF165 基因转染兔骨髓间充质干细胞治疗兔激素性股骨头缺血性 坏死 摘 要 目的:探讨使用基因转染技术将 VEGF165 基因转染入造模后实验动物的骨髓间充质干 细胞中并结合自体骨移植治疗兔激素性股骨头缺血性坏死。 方法: 1. 成年新西兰大白兔(18~23 周龄)42 只,体重 2.5±0.5kg。每只使用马血清 10ml/kg,经兔耳缘静脉注射一次,间隔两周后再注射一次。两周后肌肉注射醋酸泼尼 松龙 8mg/kg,间隔一天注射一次,共 5 次。以最后一次注射激素 4 周后,随机处死 2 只实验动物检查造模情况。 2. 选取胫骨近端外侧,无菌条件下抽取 5ml 骨髓液,使用密度为 1.073g/ml 的 Percoll 分离液分离骨髓间充质干细胞并进行贴壁培养。检测造模后实验动物的骨髓间 充质干细胞的增殖水平,并进行超微结构观察。 3. 根据随机区组设计原则将造模后的实验动物分 A 组(股骨头不作处理);B 组 (行髓心减压+自体骨移植);C(行髓心减压+骨髓间充质干细胞+自体骨移植);D(行 髓心减压+腺病毒转染骨髓间充质干细胞+自体骨移植)。每组 10 只实验动物。取髋关节 后外侧切口暴露股骨头进行髓心减压,钻孔直径 2mm,深 4mm。分别对各组进行治疗。 4. 术后 3 周处死实验动物进行病理学、免疫组织化学检查及 Western Blot 检测 股骨头内 VEGF 的表达。 结果: 1. 携带有 VEGF165 基因的腺病毒可以转染从造模后动物模型体内提取的骨髓间充 质干细胞并可以表达目的蛋白。表达目的蛋白的量较正常细胞少,差别据有统计学意义。 2. 通过对实验各组进行病理学、免疫组织化学及 Western Blot 检测我们发现: A 组:空骨陷窝率(24.76±1.20%);软骨下血管(2.27±0.84 个);VEGF 平均灰度值 (70.78±2.95);VEGF 阳性面积百分比(8.72±1.83%);股骨头内 VEGF 的相对浓度 (0.314±0.125)。B 组:空骨陷窝率(21.82±1.78%);软骨下血管(2.85±0.85 个);VEGF 平均灰度值(61.07±2.91);VEGF 阳性面积百分比(14.82±1.44%);股骨头内 VEGF 的相对浓度(0.664±0.090)。C 组:空骨陷窝率(17.52±1.39%);软骨下血管(4.26±1.03 个);VEGF 平均灰度值(57.50±3.27);VEGF 阳性面积百分比(17.61±1.79%);股 骨头内 VEGF 的相对浓度(0.863±0.079)。D 组:空骨陷窝率(12.92±1.79%);软骨下 血管( 7.19±1.72 个 ); VEGF 平 均 灰 度 值 ( 49.20±1.91 ); VEGF 阳 性 面 积 百 分 比 (21.99±2.14%);股骨头内 VEGF 的相对浓度(1.029±0.097)。通过比较我们发现 D 组在 软骨下血管、VEGF 阳性面积百分比、股骨头内 VEGF 的相对浓度高于其他各组;在 VEGF 平均灰度值、空骨陷窝率低于其他各组,并且各组之间的差异具有统计学意义,说明 D 组的治疗具有一定效果。 结论: 1. 兔激素性股骨头缺血性坏死实验动物体内的骨髓间充质干细胞可以作为基因 治疗的受体细胞。 2. 这种转染后的骨髓间充值干细胞对兔激素性股骨头缺血性坏死具有一定的治 疗作用。 关键词:兔激素性股骨头缺血性坏死;骨髓间充质干细胞;腺病毒;血管内皮细胞 生长因子 宁夏医科大学硕士研究生学位论文英文摘要 宁夏医科大学硕士研究生学位论文

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