Wnt5a信号通路介导核苷类逆转录酶抑制剂引起的神经炎症研究-生物制药专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 hlIll hlIll-to-←- lll- 学位论文作者完全了解浙江理工大学有权保留并向国家有关部门或机构送 交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江理工大学可以 将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 〈保密的学位论文在解密后适用本授权书〉 学位论文作者签名: 来AA 盆 签字日期:列Ib年5月2S B 导师签名:给少吃 签字日期必l供了月庐 万方数据 万方数据 本研究由 浙江省自然基金项目 “Wnt5a/CaMKIIα信号通路在 HIV-1 相关的 慢性疼痛发生中的作用” （LY13H090015） 提供资助 浙江理工大学硕士论文Wn 浙江理工大学硕士论文 Wnt5a 信号通路介导核苷类逆转录酶抑制剂引起的神经炎症研究 摘要 核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）作为高效抗逆转录病毒治疗（HAART）的一个核心组成 部分，被广泛用于抑制人类免疫缺陷病毒（HIV）的复制和增殖。然而，长期服用 NRTI 类药 物可引发神经毒性，主要表现为神经炎症和多种神经认知障碍，如阿耳茨海默氏病、帕金森 氏病和慢性疼痛等。尽管 NRTI 用于治疗艾滋病已有数十年，但目前对于 NRTI 引发神经炎症 的具体机制还是不甚明了。Wnt5a 是非经典 Wnt 信号的主要配体之一，在组织发育和信号转 导过程中发挥重要作用。最近的研究发现，Wnt5a 参与和调控多种神经炎症反应。所以我们 推测 Wnt5a 在 NRTI 导致的神经炎症中可能起到关键性作用。本研究不仅有助于理解 NRTI 在中枢神经系统中对神经炎症发生的影响，而且将为治疗 HIV-1 相关的神经炎症提供潜在的 药物靶点。 为了探究 NRTI 的治疗对中枢神经系统不同组织中炎症因子表达情况的影响，我们分别用 NRTI 类药物 AZT(100 mg/kg；sc./ days)、3TC (50 mg/kg；sc./ days)和 D4T (10 mg/kg；sc./ days) 对 C57Bl/6 小鼠进行 2、5、10 和 14 天的处理，并于 NRTI 类药物给药结束时收集中枢神经系 统的组织。通过 Western blotting 分析 NRTI 处理不同时间后小鼠大脑皮层、海马和脊髓组织 中炎症因子 IL-1β， TNF-α 和 IL-6 的表达水平。Western blotting 结果表明 NRTI 处理后，炎 症因子在三种神经组织中都显著性增加。 我们分别使用 GFAP 和 CD11b 标记星形胶质细胞和小胶质细胞，进一步研究 NRTI 通过 激活哪一类神经细胞来调控免疫反应。免疫染色结果表明，在中枢神经系统中 NRTI 可以显著 激活星形胶质细胞，然而小胶质细胞则没有被明显激活。 确定 NRTI 在中枢神经系统中引起神经炎症后，我们通过 HE 染色进一步研究了 NRTI 对 中枢神经系统组织病变的影响情况。组织形态学分析表明，短期使用 NRTI 类药物未引起海马 和脊髓组织发生显著病变。 近期有报道发现 Wnt5a 在皮层最初形成时对 IL-1β 和 TNF-α 具有重要的调节作用，我们 推测引起神经炎症的 NRTI 诱导 Wnt5a 表达。通过 Western blotting 和免疫组织化学染色的方 法检测到中枢神经系统中 NRTI 可明显上调 Wnt5a，初步表明 NRTI 可能激活 Wnt5a。为了进 一步研究 Wnt5a 对 NRTI 诱导的神经炎症的作用，我们利用 Wnt5a 的特异性拮抗剂 BOX5 来 抑制 Wnt5a。Western blotting 结果表明，BOX5 可以显著性降低 NRTI 诱导的炎症因子上调。 I 而且，免疫组织化学染色结果表明，BOX5 显著性抑制了 NRTI 对星型胶质细胞的激活作用。 综上所述，NRTI 类药物导致了神经炎症，并且是通过 Wnt5a 信号通路介导的。 关键词：核苷类逆转录酶抑制剂；神经炎症；星型胶质细胞；Wnt5a II Abstract The highly active anti-retroviral therapy (HAART) is very successful in suppressing the replication of HIV-1 virus in patients. However, the HIV-1 patients who are receiving long-term treatment of HAART, are found to easily develop into neurological disorders despite decreased HIV loads. N