vMIP-Ⅱ在大肠杆菌表达、纯化的条件优化及活性鉴定-病理学专业论文.docxVIP

一 对 外 周 血 单 个 核 细 胞 增 殖 的影 响 … … 二 讨 论 … … 实验 结 论 … … 参考文 献 … … 附 图 和 说 明 … … 在 读期 间 发 表 的论 文 … … 致 谢 … … 中 文 摘 要 目的 本研 究 主 要 对 病 毒 基 因来源 的人 趋 化 因 子 同源 物 在 原 核 细 胞 的表 达 及 纯 化 条 件 进 行 优 化 并对 其 活 性 进 行 鉴 定 为 大 量 获 取 单 链 和 将 其 用 于 趋 化 因 子 受 体 封 闭 因 子 的临床 应 用 打 下 基 础 方 法 本 实验 对 已 克 隆转 化 的 菌 株 进 行 诱 导 并 用 亲 和 纯 化 目的 蛋 白 再 经 一 和 分 析 纯 化 结 果 以 趋 化 小 室 和 包 被 的 孔 板 对 的 生 物 学 活 性 进 行 鉴 定 用 法 检 测 对 外 周 血 单 个 核 细 胞 的毒 性 及 对 细 胞 增 殖 的 影 响 结 果 融 合 蛋 白在 大 肠 杆 菌 中 呈 高 效 分 泌 型 表 可 见 在 们 们 比 位 置 有 一 明 显 的 诱 导 表 达 条 带 最 佳 诱 导 条 件 为 培 养 基 正 ℃ 诱 导 免 疫 印 记 结 果 显 示 在 位 置 有 一 明 显 的 蓝 染 条 带 该 菌 的最 佳 纯 化 条 件 为 的 缓 冲 液 用 量 为 功心 湿 菌 浓 度 为 比 该 法 获 得 的 融 合 蛋 白酶 切 后 得 到 的 单 体 活 性 较 高 对 趋 化 豁 附特 性 的 抑 制 率 达 的 细 胞 毒 性 较 低 对 刺 激 的淋 巴 细 胞 的增 殖 性 应 答 没 有 抑 制 作 用 结 论 温 度 及 培 养 基 类 型 影 响 工 一 转 化 菌 在 大 肠 杆 菌 中 的 表 达 效 果 工 浓 度 对 该 菌 诱 导 表 达 量 无 明 显 影 响 由 于 标 记 蛋 白 端 融 合 检 测 到 抗 原 性 说 明 该 载 体 成 功 诱 导 表 达 融 合 蛋 白 没 有 出现 错 误 的 转 录 终 止 融 合 蛋 白的亲 和 层 析 依 赖 于 配 体 与 配 基 的 结 合 不 受 溶 液 中离 子 浓 度 的 影 响 裂 解 上 清 杂 蛋 白浓 度 较 高 会 干 扰 目的 蛋 白 的 亲 和 纯 化 工 一 爪 融 合 蛋 白亲 和 层 析 得 到 的 目的 蛋 白纯 度 高 而 且 有 较 高 的 活 性 能 封 闭单 个 核 细 胞 表 面 的 趋 化 因 子 受 体 明 显 抑 制 细 胞 的趋 化 粘 附特 性 关键 词 病 毒 巨 噬 细 胞 炎症 蛋 白 亲 和 层 析 免疫 印记 外 周 血 单 个 核细 胞 红厂 附‘ 材 一 一 一 一加 一 一 一 一 一而 一 一 一 一 一 一 、 一 一 一 夕 缩 略 语 表 获 得 性 免 疫 缺 陷综 合 征 嗅氯幻。 过 硫 酸 钱 嗅 氯  叫 噪 磷 酸 盐 碱 基 对 五 们。 班 班 牛 血 清 白蛋 白 趋 化 因 子 受 体 乙 二 胺 四 乙 酸 人 类 疤 疹 病 毒 人 类 免 疫 缺 陷 病 毒 白介 素 异 丙 基 硫 代 半 乳 糖 普 千 道 尔 顿 卡 波 氏 肉瘤 卡 波 氏 肉瘤 病 毒 麦 芽 糖 结 合 蛋 白 噬 哇 蓝 眨 而 肠 而 以 而 分 子 量 氮 蓝 四 哇 光 密 度 外 周 血 单 个 核 细 胞 磷 酸 盐 缓 冲 液 每 分 钟 转 速 十 二 烷 基 磺 酸钠 四 甲基 乙 二 胺 三 轻 甲基 胺 基 甲烷 病 毒 巨 噬 细 胞 炎症 蛋 白 在 大 肠 杆菌 表达 纯 化 的 条 件优 化 及 活 性 鉴 定 前 言 一 卡波 氏 肉瘤 是 一 种 血 管 多 发 性 肿 瘤 常 见 于 免 疫 缺 陷病 的 患 者 自从 流 行 以来 己 成 为 非 洲 地 区 最 常 见 的肿 瘤 之 一 【 对 或 可 能 患 有 的 高危 人 群 进 行 活 检 发 现 了 卡 波 氏 肉瘤 病 印 的 基 因 组 ， 该病 毒 又 称 人 疤 疹 病 毒 这 些 都 表 明 参 与 了 的病 理 发 生 过 程 编 码 两 种 病 毒 基 因 产 物 与 人 类 趋 化 因 子 氨 基 酸 序 列 有 相 似 性 尤 其 与 都 有 较 高 的 同 源 性 一 种 是 由 的 开 放 阅读 框 基 因 编 码 蛋 白分 子 大 小 为 与 。 的 氨 基 酸 序 列 同 源 性 为 另 一