波生坦对肺纤维化大鼠肺血管重构血浆ET―I影响.docVIP

波生坦对肺纤维化大鼠肺血管重构血浆ET―I影响 　　摘要：目的：探讨波生坦对肺纤维化（PF）大鼠肺血管重构、血浆ET-I的影响。方法：将48只Wistar大鼠均分为6组：对照2，4周组（C2、C4组）、模型2，4周组（M2、M4组）及治疗组（T1、T2组）。予博莱霉素建模，Tl、T2组分别于第2，15天开始每天予波生坦灌胃至第28天。HE染色观察肺血管病理，EI_ISA法测定血浆ET-l浓度。结果：①M2组大鼠肺血管内皮脱落，平滑肌增殖致管腔狭窄，M4组较M2组进展；TI组肺血管重构明显减轻；T2组与M4组比较差异无统计学意义。②M2、M4组大鼠肺动脉管壁厚度（VT）较C2、C4组增加[（33.0±8.1）μm、（49.8±7.6）μm比（23.2±5.6）μm、（21.5±6.3）μm]（PO.05），Tl组[（31.3±6.5）μm]较M4组[（49.8±7.6）μm]明显下降。③M2、M4组血浆ET-l浓度明显高于C2、C4组，Tl组较M4组下降，PO.05。结论：波生坦可减轻PF大鼠的肺血管重构，可能通过早期阶段抑制ET-I起作用。 　　关键词：波生坦；肺纤维化；肺血管重构；血浆内皮素-l 　　中图分类号：R563；R446. 61 　　文献标志码：A 　　文章编号：1008-2409（2015）03-0001-04 　　肺纤维化（pulmonary fibrosis，PF）是一类以弥漫性肺泡炎、肺泡结构紊乱和间质纤维化为特征，并最终导致呼吸衰竭的高致死性疾病，病变主要累及肺间质、肺泡上皮和肺血管等。目前资料提示20%～40%的PF患者合并肺动脉高压（PAH），使得病情急剧恶化。肺纤维化合并的PAH属于“呼吸系统疾病/低氧血症相关PAH”的一种继发性类型；病理上可观察到肺血管平滑肌增殖、管腔狭窄等重构性改变。阻断PF的肺血管重构，减少PAH发生有助于改善PF患者的预后和生存质量，是治疗肺纤维化的新靶向。因此，本研究应用内皮素受体拮抗剂波生坦对博来霉素诱导的PF大鼠进行干预，观察其对肺血管重构、血浆内皮素一1（ET-I）的影响，进一步探讨肺纤维化合并PAH的发病机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　清洁级成年雄性Wistar大鼠48只，购自中山大学实验动物中心[动物合格证号：SCXK（粤）2011-0029；实验许可证号：SYXK（粤）2012-0081]；体重（204±31）g。随机分为6组：正常对照2，4周组（C2、C4）、PF模型2，4周组（M2、M4）及波生坦治疗组（TI、T2）。盐酸博莱霉素注射液购自日本化药株式会社，波生坦片购自瑞士Actelion Pharmaceuti-cals Ltd公司。 　　1.2 　　PF模型建立与治疗 　　以2%戊巴比妥钠溶液腹腔内注射充分麻醉大鼠，固定于实验台，平卧头稍后仰，碘伏消毒后逐层切开颈部皮肤，钝性分离至暴露气管。①M2、M4组及T1、T2组大鼠造模：参考金晓光等实验方法，将盐酸博莱霉素以生理盐水配制成5mg/ml的浓度；取一次性无菌干燥注射器按5mg/kg吸取配制溶液，缓慢刺人大鼠气管软骨环间隙，回抽有气体后将博莱霉素溶液注入气管，直立大鼠并反复旋转，使药物在肺内均匀分布。对照C2、C4组给予等量生理盐水空白对照。缝合颈部伤口皮肤，大鼠复苏后在实验室内继续饲养。②波生坦治疗及安慰剂对照：将波生坦片捣碎成粉末状，配制成生理盐水混悬液，Tl、T2组大鼠分别于第2，15天开始按100mg kg-1.d-1灌胃治疗；其余大鼠予等量生理盐水灌胃对照。 　　1.3 病理标本制备及HE染色 　　C2、M2及C4、M4、T1、T2组大鼠分别于2，4周末麻醉后颈部脱臼处死，剪开胸腔，取出右肺下叶用含肝素的生理盐水反复浸泡冲洗。置入4%多聚甲醛缓冲液中固定。常规脱水后制备石蜡切片进行苏木精一伊红（HE）染色。 　　1.4 病理标本观察 　　①每张切片随机选取3个视野，采用高倍光学显微镜观察各级肺动静脉的血管内膜、中膜平滑肌细胞层、弹力层以及血管外基质等病理改变。②采用1m-age-pro plus6图像分析软件测定直径150～300μm小动脉的管壁厚度（VT）。 　　1.5 血浆ET-I浓度测定 　　第28天留取各组大鼠血液标本，于下腔静脉抽取静脉血3～5ml，室温静置后离心取上清液；应用酶联免疫反应（ELISA）试剂盒检测各组大鼠血浆的ET-I浓度，微机处理测量数据。 　　1.6 统计学方法 　　应用SPSS 17.0统计软件进行分析。数据以均数±标准差（x±s）表示；各组均数比较使用单因素方差分析；组间比较采用SNK-q检验或t检验，P0.05为有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 试验前后大鼠一般情况 　　试验前各