β-榄香烯对膀胱癌T24细胞增殖及MTA-1基因表达的影响-泌尿外科专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 TAE Tris/boric acid electrophoresis (buffer) Tris/ 硼酸电 泳缓冲液 TBSE Tris/EDTA buffer saline Tris/EDTA 缓 冲盐溶液 MTA-1 metastasis-associated gene 1 肿瘤转移相 关基因 PCD programmel cell death 程序化细胞 死亡 IC-50 50%inhibiting concentration 50% 抑 制 浓 度 β-榄香烯对膀胱癌 T24 细胞增殖及 MTA-1 基因表达的影响 中 文 摘 要 目的：研究 β-榄香烯对膀胱癌 T24 细胞增殖及其对 MTA-1 基因表达的影响， 探讨 β-榄香烯诱导膀胱癌细胞凋亡及其可能机制，为进一步研究 β-榄香烯的抗 癌作用和临床应用 β-榄香烯提供实验依据。 方法：体外培养 T24 细胞，以浓度分别 为 0.004mg/ml、0.008mg/ml、 0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml 的 β-榄香烯分别 作用 T24 细胞 24h、48h 和 72h，应用 MTT 方法测定各组 β-榄香烯对膀胱癌 T24 细胞增殖的抑制作用；运用 IC50 软件计算出高于 IC50 所用的最低浓度 β-榄香烯， 以此浓度的 β-榄香烯作用 T24 细胞 24h、48h、72h，分别运用 Western-blot、RT-PCR 法检测对 MTA-1 蛋白和 MTA-1mRNA 表达水平的影响；应用光镜观察各组膀胱 癌细胞形态学的改变。并设置浓度为 0mg/mlβ-榄香烯作为对照组。 结果： MTT 比色法结果显示：对 T24 细胞的抑制率在 50﹪以上的最低浓度 β-榄香烯为 0.02mg/ml；其它各处理组不同浓度的 β-榄香烯均能抑制 T24 细胞生 长，并且 T24 细胞的成活率随 β-榄香烯的浓度增加和作用时间的延长而降低，存 在剂量和作用时间依赖性。以 0.02mg/ml 浓度 β-榄香烯作用 T24 细胞 24h、48h 和 72h， Western-blot 检测各组 MTA-1 蛋白表达相对值分别是(0.845±0.014)， (0.667±0.016)，(0.478±0.018),与对照组(0.975±0.016)比较差别有显著性(P0.05)， 而各处理组组间比较差别有显著性(P0.01）；RT-PCR 检测各组 MTA-1mRNA 表 达相对值分别是(0.867±0.005),(0.797±0.004),(0.717±0.007),与对照组(0.992±0.009) 比较差别有显著性(P0.05)，而各处理组组间比较差别有显著性(P0.01)，这些结 果显示 β-榄香烯能够降低 T24 细胞中 MTA-1 蛋白和 MTA-1mRNA 的表达，并呈 时间依赖性。以 0.02mg/ml 浓度 β-榄香烯作用 T24 细胞 24h、48h 和 72h，光镜 观察各处理组 T24 细胞形态结果显示：随着 0.02mg/ml 浓度 β-榄香烯作用时间 的延长，细胞形状逐渐变为圆形或不规则形，数量增多，贴壁能力下降，表面出 现发芽现象，细胞体积明显缩小，胞浆浓缩，胞核比例明显变小，出现单层细胞 漂浮、掀起，部分细胞崩解成碎片，或失去了细胞正常形态。 结论：β-榄香烯能明显抑制膀胱癌 T24 细胞的生长和增殖，可诱导膀胱癌 T24 细胞凋亡。其机制可能与下调膀胱癌 T24 细胞 MTA-1 蛋白和 MTA-1mRNA 的表 达有关。 关键词：β-榄香烯；膀胱癌； MTA-1；T24 细胞；增殖 Effects of Proliferation and Expression of Mta-1 gene with Elemene in Bladder cancer T24 Cell lines Abstract Objective: To study the β-elemene on cell proliferation in T24 bladder tumor cell lines and its expression of MTA-1, deeply investigated how the β-elemene induced apoptosis of bladder cancer and its possible mechanism .In order to provide experimental evidence for the further study of β-elemene anti-cancer action and clinical