β-catenin在BMSC参与Hp慢性感染致胃癌发生中的作用-消化内科专业论文.docxVIP

华中 科技 大 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 β-catenin 在 BMSC 参与 Hp 慢性感染致胃癌发生中的作用 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科 硕士研究生： 王园园 指 导 教 师 ：朱良如 副教授 蔺 蓉 副教授 摘 要 【目的】Wnt 信号参与胃癌发生的过程，其中β-catenin/Tcf4/Fzd5 是经典 Wnt 信号传导通路中的关键蛋白, 骨髓基质干细胞(Bone marrow stromal cells,BMSC)被认为参与胃癌的发生，但具体机制尚不清楚。本课题以 Wnt 信号传导通路为靶点，通过 shRNA 技术干扰小鼠骨髓基质干细胞β-catenin 表达，探求 BMSC 在幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）慢性感染致 胃癌发生过程中的可能机制。 【方法】构建含有β-catenin-shRNA 的特异性真核表达载体。BMSC 用含 10% FBS 的 DMEM 培养液培养,按 2×105/孔的浓度接种于 Transwell 上室, 37℃、50 m L/LCO2 培养箱中培养 24 h ,待细胞贴壁率达到 60%后,用 Lipo-fectamine2000 进行转染。β-catenin-shRNA 处理组为实验组, shRNA 错义序列处理组为阴性对照组。测定转染率，转染 48h 后，采用 Western Blot 方法检测 BMSC 中β-catenin 的表达。然后按照 BMSC、小鼠胃癌细 胞（MFC）、Hp 超声粉碎物(1:10:100)比例建立体外 Transwell 共培养体 系，培养箱中共培养 24h 后，采用 Real-time PCR 方法和 Western Blot 方法检测 MFC 中β-catenin mRNA 和总蛋白的变化。 【结果】β-catenin-shRNA 转染 BMSC 48h 后，BMSC 中β-catenin 蛋白 表达下降。BMSC、MFC、HP 超声粉碎物共培养 24h 后，与阴性对照组 相 比 ， shRNA 干 扰 MSC 后 ， MFC 中 β-catenin 总 mRNA 表 达 下 降 （ 0.488±0.120 ﹔ 1.026±0.057 ﹔ P0.05 ） , β-catenin 蛋 白 表 达 亦 下 降 （0.687±0.107﹔1.06±0.113﹔P0.05）。 【结论】BMSC 参与调控 Hp 慢性感染致胃癌发生早期事件 Wnt 信号通路 的过程。BMSC 作为一种良好的基因工程细胞，可为今后胃癌的治疗提供 新的思路和方法。 【关键词】β-catenin，Wnt 信号，RNA 干扰，骨髓基质干细胞，胃癌 The effects of β-catenin in BMSC participate Hp chronic infection induced gastric cancers Abstract Aims ： Wnt signaling is involved in the process of gastric cancer,the β-catenin/Tcf4/Fzd5 is a key protein in the classic Wnt signaling pathway,BMSC are thought to be involved in gastric cancer,but the mechanisms are unclear.This topic takes Wnt signaling pathway as a target, by the technology of shRNA interference the mouse bone marrow stromal stem cells(BMSC) and determinating the β-catenin protein expression of BMSC,to explore the mechanism of BMSC in Hp chronic infection induced gastric cancers after β-catenin-shRNA transfected BMSC. Methods:Building the specific eukaryotic expression vector containing the β-catenin-shRNA. BMSC with a 10% FBS-containing DMEM culture medium, according to a concentration of 2×105/ well s