川楝胶囊对经前期综合征肝气逆证猕猴模型表情行为及微观指标影响.docVIP

川楝胶囊对经前期综合征肝气逆证猕猴模型表情行为及微观指标影响 　　[摘要] 目的 探讨川楝胶囊对经前期综合征肝气逆证猕猴模型表情行为及微观指标的影响。 方法 采用择时挤压造模法，并以放射免疫法和毛细管电泳法分别测定其血清及尿中激素、递质水平。结果 川楝胶囊可显著改善模型猕猴表情行为异常，并对造模刺激所致模型猕猴雌二醇水平的下降和对泌乳素、5-羟色胺、去甲肾上腺素水平的上升起到一定的纠正与调节作用，使其恢复至接近正常水平。 结论 川楝胶囊对经前期综合征肝气逆证所引起的单胺类神经递质和性激素及其调节激素分泌紊乱有一定的治疗作用，这一发现为病证的临床药物干预提供了药效学实验依据。 　　[关键词]肝气逆证；猕猴模型；激素；神经递质；川楝胶囊 　　[中图分类号] R259 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）23-32-04 　　经前期综合征（premenstrual syndrome，PMS）肝气逆证以经前期情绪激动、烦躁易怒、失眠、乳房及小腹胀痛等为主要症状，系由肝疏泄太过而导致肝气上逆所致[1]。川楝胶囊根据以上病机和主症，立疏肝理气、除胀止痛为法，临床调查结果证实可有效缓解PMS肝气逆证患者症状表现。为了解川楝胶囊干预PMS肝气逆证作用机制，本研究采用择时挤压造模法、放射免疫法和毛细管电泳法，探讨了川楝胶囊对经前期综合征肝气逆证猕猴模型表情行为及微观指标的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　雌性青年实验猕猴24只，体质量4～5kg，4～5岁，月经正常，由苏州西山中科实验动物有限公司提供[SYXK（苏）2002-0032]。 　　1.2 药品及试剂 　　放射免疫药盒：天津九鼎，批号112308。标准品：由美国SIGMA公司提供。经前平颗粒：江苏扬子江药业集团公司，批号：040216。川楝胶囊（自制），批号5。 　　1.3 仪器 　　实验猕猴自动挤压造模保定装置（山东中医药大学和武汉大学计算机学院联合开发）；盒式录像机HR-S9500EK（北京中西远大科技有限公司）；监视器SP-309（松下电器实业有限公司）；照相机（松下电器实业有限公司）；毛细管电泳仪HP3D（美国Agilent公司）；LD5-10自动平衡微量离心机（北京京立离心机有限公司）。 　　1.4 实验方法 　　1.4.1 雌性实验猕猴性周期（即月经周期）的划分方法 正常雌性实验猕猴性周期平均约为28d。根据实验猕猴月经周期性皮肤（指面部、腿根、尾根、生殖器、肛门等部位皮肤）的变红、舒张、肿胀、消退、恢复的周期性变化结合阴道涂片镜检法[2]将其月经周期分为卵泡期、黄体期、经前期和月经期四个时期，具体见表1。 　　1.4.2 雌性实验猕猴表情行为的观测方法 按表1的划分判定雌性实验猕猴的期属，安装录相机、监视仪，每日上午 　　1.4.3 猕猴造模给药实验方法 将24只雌性青年猕猴依随机数字表分为 6组，分别为正常对照组、模型组、经前平颗粒阳性对照药组及川楝胶囊大、中、小剂量组，每组4只。模型及给药组猕猴于月经周期的黄体期（约月经周期第17天）开始造模，此时将雌猴赶入自动挤压保定造模装置，挤压，以猕猴稍能活动为限，每天挤压5h（从上午9：00～下午2：00），连续挤压造模7d（约月经周期第17～23天）（不挤压时猕猴仍处于造模装置内），同时开启装置自带监控摄像头监视其表情行为变化，并手动录像拍照，连续造模2个月经周期[2]。给药组猕猴造模同时给药，经前平颗粒阳性对照组剂量为0.4g成药/kg体质量，灌胃给药。川楝胶囊大、中、小剂量组用量分别为 2.25g生药/kg、1.35g生药/kg、0.45g生药/kg，灌胃给药。给药时间为每天上午9：00，每日1次，连续7d。造模结束后将猕猴放归原笼，结束造模后的第1个月经期、经前期，同样监视其表情行为变化，并录像拍照。 　　2个月经周期造模结束后即分别对各组猕猴取血，收集尿样。取血尿时期为模型猕猴症状呈现期即经前期（约为月经周期第24～28d任意一天）。后肢大隐静脉取血4mL，放入离心机以3000r/min离心15min，取血清；尿样以集尿器采集，去除毛发和粪便等杂物，离心备用。血清和尿中催乳素（PRL）、雌二醇（E2）、孕酮（P）含量以放射免疫法测定；血清及尿中5-羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、肾上腺素（E）、去甲肾上腺素（NE）的含量则以毛细管电泳法测定。 　　1.5 统计学方法 　　应用SPSS13.0统计软件，数据用（）表示，多组样本均数比较采用单因素方差分析及LSD-t法检验，检验水准α=0.05。 　　2 结果 　　2.1 造模及给药后猕猴宏观表现观察 　　挤压造模期间（黄体中晚期），猕猴性皮肤及表情行为与正