川续断皂苷VI及其活性代谢物在大鼠体内药代动力学研究.docVIP

川续断皂苷VI及其活性代谢物在大鼠体内药代动力学研究 　　[摘要]研究川续断皂苷VI（asperosaponin VI，A-VI）及其活性代谢产物常春藤皂苷元（hederagenin，M1）在大鼠体内的药代动力学、排泄特征和A-VI 的大鼠血浆蛋白结合率。采用已建立的LC-MS/MS法测定大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中A-VI 和M1 浓度，计算药代动力学参数，并用平衡透析法测定大鼠血浆中A-VI的血浆蛋白结合率。大鼠以低、中、高（0.03，0.09，0.27 g·kg-1）3个剂量分别单次灌胃给予A-VI 后， A-VI 的血药浓度-时间曲线出现双峰现象，Cmax1和Cmax2分别为（28.88±49.78）和（4.480±1.872） μg·L-1，（35.19±23.53）和（22.11±16.15） μg·L-1，（73.37±37.28）和（132.2±160.7） μg·L-1；AUC0-t分别为（43.21±37.32），（133.9±102.5），（779.6±876.9） μg·h·L-1；t1/2 分别为（3.3±0.8），（3.2±2.3），（4.5±1.2） h。代谢产物M1相应的Cmax分别为（16.03±9.336），（26.41±11.95），（28.71±5.874） μg·L-1；AUC0-t分别为（105.6±73.60），（260.0±153.9），（323.1±107.9） μg·h·L-1；t1/2 分别为（4.1±3.4），（4.4±2.3），（3.9±0.9） h。A-VI 和M1 在大鼠体内药动学特征不存在性别差异，按0.09 g·kg-1剂量多次灌胃A-VI后A-VI 和M1 在体内均无蓄积。灌胃A-VI后，A-VI的胆汁和尿液排泄速率-时间曲线也出现双峰现象，灌胃A-VI 6 h以后可以在大鼠粪便中检测到M1。A-VI 在大鼠血浆中的平均血浆蛋白结合率为 92.9%。 　　[关键词]川续断皂苷VI；常春藤皂苷元；药代动力学；蛋白结合率；胆汁排泄；尿液排泄；平衡透析法 　　川续断皂苷VI（A-VI）是续断药材主要活性成分，具有抗氧化、镇痛、心肌保护和抗老年痴呆的药理作用[1-2]。常春藤皂苷元（M1）为A-VI的主要活性代谢产物，具有抗抑郁、抗炎症等作用[3-4]。本课题组前期报道了大鼠粪便中A-VI的5个代谢产物[3]，其中M1为主要代谢产物；报道了LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中A-VI和M1的方法及其在药动学预试验研究中的运用[5]，LC-MS/MS测定比格犬血浆中A-VI的方法及其在药动学预试验研究中的运用[6]。目前除了作者前期的初步研究，有关A-VI在体内的过程及血浆蛋白结合率未见报道。本实验对大鼠灌胃A-VI后原形及其活性代谢产物M1的药代动力学及胆汁、尿液和粪便排泄进行研究，采用平衡透析法[7-8]考察了A-VI与大鼠血浆蛋白的结合情况，为A-VI的进一步研发和临床应用提供参考。 　　1 材料 　　对照品川续断皂苷VI（批号 200412009，纯度 98.6%）和常春藤皂苷元（批号 111733-200904，纯度 98.0%）、地西泮（批号 171225-200903）和甘草次酸（批号 110723-200612）购自中国食品药品检定研究院；川续断皂苷VI原料药（批号纯度 91.5%）为神华药业有限公司中试放大产品；甲醇和乙腈（色谱纯，Merk Company）；乙酸（色谱纯，江苏汉邦科技股份有限公司）；其他试剂均为市售分析纯。 　　Agilent 1200液相色谱-Agilent 6410B三重四极杆串联质谱联用仪，配有电喷雾离子源；pH计（型号PHS-25型，上海精密科学仪器有限公司）；高速离心机（型号1612-1型，上海医疗器械集团有限公司）；数显恒温水浴锅（型号HH-2型，国化电器有限公司）；Sartorius电子天平（型号BP211D）；透析袋（MWCO：8 000～1万Da，2.7 cm，上海蓝季科技发展有限公司）。 　　SPF级Sprague Dawley（SD）系大鼠，体重180～210 g，雌雄各半，由浙江省实验动物中心提供，合格证号SCXK（浙）2008-0033。 　　2 方法 　　2.1 生物样品检测方法 　　见参考文献[4]。 　　2.2 大鼠单、多次灌胃A-VI的药动学研究 　　取大鼠48只，体重180～210 g，随机分成4组，每组12只，雄雌各半。单次灌胃A-VI组：实验前禁食12 h（不禁水），按低、中、高（0.03， 0.09， 0.27 g·kg-1）剂量分别灌胃给予A-VI的0.5%CMC-Na混悬液，于灌胃A-VI前及灌胃A-VI 10，20，30 min，1，2，3，5