思密达对大肠杆菌K88体外抑菌活性及吸附清除能力研究.docVIP

思密达对大肠杆菌K88体外抑菌活性及吸附清除能力研究 　　摘要：目的 探讨体外思密达对大肠杆菌K88的抑菌活性及吸附清除能力。方法 利用体外抑菌实验及吸附清除实验研究思密达在体外对大肠杆菌的抑菌活性及吸附清除能力。结果 在体外抑菌实验中，思密达对大肠杆菌K88的生长较对照无明显抑制作用；而以不同浓度思密达进行的体外吸附清除实验中，各浓度思密达处理后的大肠杆菌K88菌落形成较对照均明显减少。结论 思密达在体外对大肠杆菌K88并无直接的抑制作用，但具明显的吸附清除能力。 　　关键词：思密达；大肠杆菌；抑菌；吸附清除 　　中图分类号： R961 文献标志码： A 　　思密达是临床治疗成人及儿童急慢性腹泻普遍应用的药物，其主要成分为蒙脱石[1]。蒙脱石主要由二层共顶联结的硅氧四面体片夹一层共棱联结的铝(镁)氧(氢氧)八面体片，构成2:1型含结晶水的硅酸盐矿物，具有相当大的表面积（约100m2/g），其层纹状分子结构及非均匀性电荷分布使硅、铝等元素被封闭在分子晶格中不易释出[2-4]。思密达对消化道粘膜有较强的覆盖能力，通过与粘液蛋白的相互结合，加强消化道粘膜的韧性，增强粘膜屏障，防止胃酸、胃蛋白酶、轮状病毒、致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、幽门螺旋杆菌及其毒素对消化道粘膜的侵害，维护消化道的正常功能。同时还能对抗腐生菌丛，平衡消化道寄生菌群，提高消化道的抗攻击能力。近年来，除了腹泻病的治疗，思密达在口腔炎与口腔溃疡、胃炎及消化性溃疡、小儿食管炎及胃食管反流等疾病的临床治疗中也得到了越来越广泛的应用[5,6]。关于思密达治疗相关疾病的机制，目前认为主要是通过吸附病原体及毒素，阻止病原微生物对粘膜及细胞的攻击，促进创面愈合[7,8]。但是关于思密达体外抑菌及吸附病原微生物的具体研究还鲜有报道。研究思密达对大肠杆菌K88的体外抑菌及吸附清除能力，能够为进一步阐明药物治疗机制提供证据。 　　1资料与方法 　　1.1药品与菌株大肠埃希氏杆菌（Escherichia coli）ATCC K88购自中国药品生物制品监察所。思密达及作为抑菌药物阳性对照的诺佛沙星均为市售药品，将思密达粉剂以灭菌蒸馏水配成浓度为5%（50mg/ml）的药液，诺佛沙星以灭菌蒸馏水配成浓度为20mg/ml的药液，备用。 　　1.2培养基配制 　　1.2.1牛肉膏蛋白胨培养基将蛋白胨5g，牛肉浸粉3g混合于800ml水中，完全溶解后补足水量至1000ml，调节pH至6.6~7.0，121℃，15min，高压灭菌，备用。 　　1.2.2牛肉膏蛋白胨琼脂培养基将蛋白胨5g，牛肉浸粉3g，琼脂13g混合于600ml水中，加热煮沸至琼脂完全溶解，补足水量至1000ml，调节pH至6.6~7.0，121℃，15min，高压灭菌，备用。 　　1.3细菌悬液制备取冻存的大肠杆菌K88菌株，解冻后接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃摇床(80cycles/min)培养过夜。为获得对数期生长的细菌，将50μl上述菌液接种于5ml新鲜牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃摇床中孵育至对数生长期（即细菌悬液OD600=0.4~0.6）。后续实验均采用该细菌悬液。 　　1.4体外抑菌实验取熔化的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基制备琼脂平皿，总容量为15ml/平皿，思密达终浓度为0.5%；以含诺佛沙星终浓度0.2mg/ml的培养基作为阳性对照。将细菌悬液20μl接种于含药培养基上，接种后以无菌三角刮板将菌液涂匀，置37℃细菌培养箱中培养16~24h，观察细菌生长情况。 　　1.5体外吸附清除实验取5%思密达药液，分别以灭菌蒸馏水稀释为1％、0.1％；分别取各稀释度的药液与等量菌液混匀（即药液终浓度分别为0.5%、0.05%）；同时取灭菌生理盐水代替药液与等量菌液混匀作为对照。将上述混合液分别静置于室温下10min、60min之后，吸取上清液，再进行10倍系列稀释，以10-4稀释度接种平皿，每皿0.1ml。接种后以无菌三角刮板将菌液涂匀，置于37℃细菌培养箱培养过夜。次日观察并计数，计算细菌清除率。以上实验平行重复3次。 　　清除率（％）＝（对照平皿含菌数－实验组含菌数）/ 对照平皿含菌数×100% 　　含菌数＝菌落数×10×稀释倍数 　　1.6统计学方法应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，数据以（x±s）表示。计量资料的比较采用t检验， P＜0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1思密达对大肠杆菌K88的体外抑制作用抑菌药物能够通过对细菌代谢的影响，使细菌呼吸量减低或酶系统受到抑制，从而使细菌不生长或部分抑制细菌生长。采用体外实验的方法，观察实验药物对细菌有无杀灭作用或抑制作用，是筛选抗菌药物或测试药物抗菌性能的重要手段。采用体外抑菌实验检测思密达在体外是否对大肠杆菌具