左氧氟沙星通过上调mmp-2和mmp-13促进大鼠椎间 盘纤维环细胞凋亡-levofloxacin promotes apoptosis of rat intervertebral disc annulus fibrosus cells by up-regulating mmp - 2 and mmp - 13.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中文摘要…………………………………………………………………… 1 英文摘要…………………………………………………………………… 3 英文缩写…………………………………………………………………… 6 研究论文 左氧氟沙星通过上调 MMP-2 和 MMP-13 促进大鼠椎间盘 纤维环细胞凋亡 前言…………………………………………………………………… 7 材料与方法…………………………………………………………… 9 结果…………………………………………………………………… 21 附图…………………………………………………………………… 23 附表…………………………………………………………………… 24 讨论…………………………………………………………………… 29 结论…………………………………………………………………… 32 参考文献……………………………………………………………… 33 综述 基质金属蛋白酶与椎间盘细胞退变的研究进展……..…………… 37 致谢………………………………………………………………………… 47 个人简历…………………………………………………………………… 48 中 文 摘 要 PAGE 1万方数据 PAGE 1 万方数据 左氧氟沙星通过上调 MMP-2 和 MMP-13 促进大鼠椎间盘纤维环 细胞凋亡 摘 要 目的：探讨左氧氟沙星诱导凋亡下大鼠纤维环细胞外基质和基质金属 蛋白酶的变化。 方法：酶消化法来原代培养大鼠的纤维环细胞，贴壁的细胞融合为单 层后传代培养，传至第3代时，以不含胎牛血清以及酚红的DMEM/ HIGH GLUCOSE(1×)培养液培养细胞，分别按照浓度依赖和时间依赖分组实验。 浓度依赖组：按以下分组实验，每组为6个样本，对照组：以不含左氧氟 沙星的培养液处理；10μg/ml组：加入浓度为10μg/ml的左氧氟沙星干预； 30μg/ml组：加入浓度为30μg/ml的左氧氟沙星干预；60μg/ml组：加入浓 度为60μg/ml的左氧氟沙星干预，90μg/ml组：加入浓度为90μg/ml的左氧 氟沙星干预；120μg/ml组：加入浓度为120μg/ml的左氧氟沙星干预，以上 各组细胞培养24小时。时间依赖组：按以下分组实验，每组为6个样本， 对照组：加入浓度为60μg/ml的左氧氟沙星干预0小时；8小时组：加入浓 度为60μg/ml的左氧氟沙星干预8小时；12小时组：加入浓度为60μg/ml的 左氧氟沙星干预12小时；24小时组：加入浓度为60μg/ml的左氧氟沙星干 预24小时，36小时组：加入浓度为60μg/ml的左氧氟沙星干预36小时；48 小时组：加入浓度为60μg/ml的左氧氟沙星干预48小时。两组实验分别应 用：1 应用倒置相差显微镜来观察大鼠的纤维环细胞形态；2 caspase-3活 性检测试剂盒检测caspase-3的活性；3 细胞-胶原粘附实验检测细胞与I型 胶原的粘附水平；4 用实时定量PCR法来检测纤维环细胞中的MMP-2和 MMP-13 蛋 白 相 关 基 因 表 达 情 况 ； 5 western 印 迹 法 对 MMP-2 蛋白 和 MMP-13蛋白定量检测。 结果：1 原代大鼠纤维环细胞多数呈现为长梭形，且轮廓明显，细胞 核呈现出圆形以及椭圆形，24～48小时后细胞可贴壁生长，8～9天细胞即 进入其对数生长期。经不同浓度左氧氟沙星干预24小时和60μg/ml的左氧 氟沙星干预不同时间后观察细胞出现细胞皱缩、空泡形成等凋亡征象；2 用caspase-3活性检测试剂盒（碧云天）来检测细胞中caspase-3的活性，结 果显示在浓度依次为10μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml、120μg/ml左 氧氟沙星干预24小时后，细胞caspase-3的活性分别为对照组的1.81倍、3.22 倍、4.23倍、5.54倍、6.56倍，差异具有统计学意义。在左氧氟沙星（60μg/ml） 依次干预0、8、12、24、36、48小时后，细胞caspase-3的活性分别为对照 组的1.54倍、2.98倍、4.18倍、5.30倍、6.40倍，差异具有统计学意义（P ＜0.05）；3 细胞与I型胶原的粘附水平实验，浓度依赖组中各组OD值分别 为对照组的0.91倍、0.83倍、0.76倍、0.70倍、0.60倍，差异具有统计学意 义。时间依赖组中各组OD值分别为对照组的0.91倍、0.82倍、0.75倍、0.67 倍、0.61倍，差异具有统计学意义（P＜0.05）；4 实时定量PCR检测，