慢性愤怒应激对脑老化大鼠学习记忆及血浆儿茶酚胺影响.docVIP

慢性愤怒应激对脑老化大鼠学习记忆及血浆儿茶酚胺影响 　　【摘 要】目的：探讨慢性愤怒应激对大鼠脑老化进程及血浆儿茶酚胺水平的影响。方法：在D-半乳糖（D-gal）衰老及脑老化模型基础上引入愤怒刺激，用Morris水迷宫实验观察慢性愤怒应激对大鼠空间学习记忆能力的影响，并测定血浆中儿茶酚胺肾上腺素（E）、去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）的含量。结果：与模型组比较，愤怒应激组大鼠空间学习记忆能力明显下降，血浆E、NE、DA均显著升高。结论：慢性愤怒应激加重D-gal大鼠脑老化程度，加速衰老进程；血浆儿茶酚胺含量升高可能是其发生的机制之一。 　　【关键词】愤怒应激；脑老化；儿茶酚胺 　　随着生活节奏加快，社会竞争日益激烈，越来越多的人们感受到社会生活更为紧张，由此引发的情绪与心理问题日益增多。愤怒是负性情绪的核心[1]，与健康和疾病的关系极为密切，有国外学者指出[2]，具有愤怒倾向的人群更易出现健康问题。中医认为，肝主疏泄，在志为怒，怒伤肝，长期或剧烈的愤怒情绪会阻碍肝疏泄气机的功能，使气机逆乱。头为诸阳之会，五脏精华之血，六腑清阳之气皆汇聚于脑，方有神明之用，若气机逆乱，气血不能正常输布于脑，脑失濡养日久则可能导致脑老化加速。那么，愤怒情志对脑老化进程究竟有何影响？其机制如何？本研究借助动物实验探讨慢性愤怒应激对大鼠脑老化进程的影响及其部分神经内分泌机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物及分组 Wistar雄性大鼠56只，SPF级3月龄，购于北京维通利华实验动物技术有限公司（SCXK（京）2006-0009），体重为360±10g。在河南省食品药品检验所动物实验中心屏障环境设施动物实验室（SYXK（豫）2005-0011）进行实验，并由该实验室提供标准实验动物灭菌饲料。正常饲养3日后，按体重随机分为空白对照组、D-gal衰老及脑老化模型组（简称模型组）、慢性愤怒应激组（简称愤怒应激组）三组，每组14只，其余14只作为攻击鼠。各组分笼饲养，自由饮食饮水。（注：模型组予以注射D-gal，愤怒应激组在注射D-gal基础上引入愤怒刺激。） 　　1.2 主要试剂及仪器 大鼠血浆E酶免试剂盒（美国RD公司，批号：09-05）；大鼠血浆NE酶免试剂盒（美国RD公司，批号：09-05）；大鼠血浆DA酶免试剂盒（美国RD公司，批号：09-05）；680自动酶标分析仪（美国伯乐）；1575自动酶标洗板机（美国伯乐）；HPS-250生化培养箱（哈尔滨市东联电子技术开发有限公司）；Morris水迷宫（成都泰盟科技有限公司）。 　　1.3 D-gal衰老模型 参考李文彬等[3] D-gal衰老及脑老化造模方法，模型组和愤怒应激组注射D-gal溶液，制作衰老及脑老化模型。具体方法：将D-gal溶于生理盐水，浓度为2%，注射容量为0.01ml？g-1，每日1次，颈后部皮下注射，空白对照组注射同体积生理盐水，连续6周。每周测体重1次，依所测体重计算注射容量。 　　1.4 愤怒应激组引入愤怒刺激的方法 课题组在夹尾间接激怒法[3]基础上，受传统直接电击法的启发，创立一种新型诱发大鼠愤怒情绪的方法――间接电击激怒法。自实验第三周始每天下午3点对愤怒应激组大鼠进行愤怒刺激。具体方法：使用特制电刺激仪作为电刺激工具，把愤怒应激组大鼠单独放入特制金属笼内，再随机放进一只攻击鼠，用一端电极触碰攻击鼠前部（电极的另一端与金属笼相连以构成回路），攻击鼠受电击被激惹，对愤怒应激组大鼠发起攻击，双方互相撕咬、对峙，产生愤怒心理和行为。频率为1～2次/min，每天刺激15min，连续4周。最后攻击鼠丢弃不用。 　　1.5 标本采集及制备 实验至第37天始，进行Morris水迷宫测试，为期6天。至第42天完成实验后，禁食24小时，按每100g体重注射0.5～1.5ml 20%乌拉坦，麻醉后经腹主动脉取血4～5ml，静置、离心，吸取上清液，-70℃保存，用于测定血浆肾上腺素（epinephrine， E）、去甲肾上腺素（norepinephrine， NE）、多巴胺（dopamine， DA）。 　　1.6 统计学方法 实验结果用SPSS 13.0统计软件包进行处理。数值变量以 进行统计描述。数值变量组间均数差异的比较，正态分布和方差符合齐性 　　检验后，采用单因素方差分析（One-way ANOVA），两两比较用LSD法，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 慢性愤怒应激对D-gal大鼠空间学习记忆能力的影响表1显示的是Morris水迷宫第6天的测试结果：愤怒应激组较模型组大鼠寻台时间（searching platform latency， SPL）明显延长（P0.05）。见表1。 　　2.2 慢性愤怒应激对D-gal大鼠血浆