苗医推拿对缓解期哮喘儿童IFN―γ、IL―4、IL―17的影响及表观遗传学机制.docVIP

苗医推拿对缓解期哮喘儿童IFN―γ、IL―4、IL―17的影响及表观遗传学机制 　　【摘要】目的：观察苗医推拿治疗缓解期儿童哮喘的临床疗效及对免疫平衡的影响，并初步探讨其表观遗传学机制。方法：30例健康儿童为健康对照组。30例哮喘缓解期儿童为推拿组，比较推拿前后儿童哮喘控制测试（C-ACT）评分，检测血清Th1、Th2及Th17的代表性细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17的含量及外周血CD4+T细胞的组蛋白乙酰转移酶（HAT）及组蛋白去乙酰化酶（HDAC）的活性。结果：苗医推拿总有效率达9334%，可升高血清IFN-γ水平，同时降低IL-4及IL-17水平，并抑制HAT活性，同时增强HDAC活性（均Plt;005）。结论：苗医推拿治疗缓解期儿童哮喘疗效肯定，能有效调节免疫平衡。组蛋白乙酰化修饰等表观遗传学机制可能在其中发挥了一定作用。 　　【关键词】湘西刘氏小儿推拿;哮喘;IFN-γ;IL-4;IL-17;表观遗传学 　　【中图分类号】R29【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）07-0011-02 　　Abstract： 　　Keywords： 　　儿童支气管哮喘是目前临床常见的慢性呼吸道疾病，有反复发作、缠绵难愈的特点[1]。经典理论认为Th1型免疫反应减弱而Th2型免疫反应异常增强在哮喘的发病过程中起到重要作用，即Th1/Th2细胞失衡学说[2-3];近年来发现Th17细胞/Treg（调节性T细胞）的免疫失衡也是哮喘发病的重要机制之一[4]。我国已故著名推拿大师刘开运教授开创了独具特色的苗医“小儿推拿”[5]，称为湘西刘氏小儿推拿流派，治疗小儿肺、脾系疾病疗效最为显著[6]。本研究对比治疗前后血清Th1、Th2及Th17的代表性细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17的含量，观察苗医推拿对缓解期哮喘儿童免疫平衡的影响;并通过检测外周血CD4+T细胞的组蛋白乙酰转移酶（HAT）及组蛋白去乙酰化酶（HDAC）的活性，初步探讨其表观遗传学机制。本研究得到了吉首大学医学伦理委员会的审查和批准（批准号。 　　1材料与方法 　　11病例资料收集吉首大学附属中医院（湘西土家族苗族自治州民族中医院）门诊病例30例，作为推拿组，其中男13例，女17例;土家族20例，苗族10例;年龄最小5岁，最大6岁半，平均645±118岁;病程最短6个月，最长4年，平均332±156年。纳入标准：①年龄5至7岁，性别不限，民族不限;②符合缓解期儿童哮喘诊断标准[7];③除哮喘外无其他疾病;④患儿家长或监护人签署知情同意书。另从健康管理中心随机收集30例健康儿童为健康对照组，要求年龄5至7岁，无过敏病史，近期无呼吸道感染史，近期未使用药物;其中男11例，女19例;土家族18例，苗族12例;年龄最小5岁，最大7岁，平均674±148岁。2组儿童在性别、民族构成、年龄等方面差异均无显著性（Pgt;005）。 　　12治疗方法推拿组治法为：补益脾肺、固肾纳气。患儿面向医生站立，取其左侧肢体施术，用姜汁作推拿介质，具体推治如下：常例手法（开天门、推坎宫、推太阳、按总筋、分阴阳各30次）。补肾经400次，补肺经350次，补脾经300次，清肝经250次，揉外劳宫100次，揉板门120次，揉按肺俞150次，捏脊5遍，推膻中120次，揉中脘、丹田各150次，揉按足三里120次，按肩井3次。 　　女童由女医师进行推拿治疗。每周治疗3次（具体时间由儿童的监护人决定），共治疗3个月。治疗前后分别采集哮喘患儿晨起空腹静脉血10ml。健康对照组儿童入组后也采集晨起空腹静脉血10ml。 　　13观察指标 　　131儿童哮喘控制测试（C-ACT）[8]治疗前后各评估一次。得分≥25分为哮喘临床控制，20～24分为部分控制，lt;20分为未控制。 　　132细胞因子含量检测IFN-γ、IL-4、IL-17试剂盒购自武汉博士德公司，酶标仪（美国Bio-Tek，ELX-800），采用ELISA法检测血清细胞因子的含量，严格按试剂盒说明书进行操作。 　　133HAT、HDAC活性检测淋巴细胞分离液购自上海研谨公司，分选MACS微珠（CD4）购自德国Miltenyi公司，HAT、HDAC活性试剂盒购自美国Biovision公司。对采集的静脉血采用密度梯度离心法（Ficoll法）分离外周血单个核细胞，免疫磁珠进一步分离CD4+T细胞，ELISA法检测吸光度。用试剂盒中一系列已知浓度的标准品绘制蛋白浓度标准曲线，计算去乙酰化赖氨酸的浓度，来代表HAT、HDAC的活性。严格按试剂盒说明书进行操作。 　　14统计学处理数据结果采用SPSS 140统计软件进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±S）表示，采用t检验。 　　2