肿瘤细胞中e2f1对icam-1的调控作用及机制的初步探索-the regulation and mechanism of e2f1 on icam - 1 in tumor cells.docxVIP

摘 摘 要 I I 摘 要 Intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)编码一个细胞表面糖蛋白，是一种 细胞间粘附分子, 它多在内皮细胞和免疫细胞中表达。ICAM-1 的配体是白细胞 粘附分子 CD18 家族中的两个成员：即淋巴细胞功能相关抗原-1(lymphocyte function-associated antigen-1, LFA-1)(CD11a/CD18) 和巨噬细胞抗原复合体 -1(Mac-1)(CD11b/CD18)。在炎症反应和肿瘤细胞的转移过程中，ICAM-1 介导的 细胞黏附发挥着极其关键的作用。 有研究发现，病理状态下,释放的一些细胞因子如 IFN-γ, IL-1 和 TNF-α 等都 可以增加 ICAM-1 的表达；也有研究发现，在内皮细胞中 NF-κB 促进 ICAM-1 的转录调控。但是目前关于 ICAM-1 基因的具体表达调控机制仍然不明确。 本实验室前期研究发现在前列腺肿瘤细胞系 DU145 中 E2F1 和 ICAM-1 的表 达具有相关性。因此本研究选择前列腺细胞系 PC3 和宫颈癌细胞系 Hela 为实验 材料，进一步研究 E2F1 和 ICAM-1 的表达之间的联系。我们利用 RNA 干扰技 术，在这两种细胞系中分别瞬时敲低 E2F1 的表达后，发现 ICAM-1 的 mRNA 水 平和蛋白表达水平均有所上升。另外，在 PC3 细胞中瞬时高表达 E2F1 可使 ICAM-1 的表达水平显著下降。这表明在这两种细胞中，E2F1 可能负调控 ICAM-1 的表达。 本课题进一步在 PC3 细胞系和 Hela 细胞系中对 ICAM-1 的启动子进行了分 析，研究了 ICAM-1 启动子上的两个潜在的 NF-κB 结合位点。通过双报告基因 检测分析发现，E2F1 可能是通过与 NF-κB 的相互作用，利用 ICAM-1 启动子上 的两个 NF-κB 结合位点，抑制了 ICAM-1 的转录。 本课题研究验证了 E2F1 对 ICAM-1 的调控作用，并进一步探讨了 E2F1 调 控细胞粘附分子 ICAM-1 的分子机制。鉴于 ICAM-1 在肿瘤的转移浸润中的重要 作用，我们的研究提示 E2F1 可能是一个重要的抑制肿瘤转移的药物靶点。 关键词：ICAM-1（细胞间粘附分子-1） E2F1 PC3 Hela ABSTRACT ABSTRACT Ⅱ Ⅱ ABSTRACT Intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) encodes a cell surface glycoprotein which is typically expressed on endothelial and immune cells. ICAM-1 binds to two integrins belonging to the CD18 family, i.e., LFA-1 (CDlla/CD18) and Mac-l (CDllb/CD18) in lymphcytes and macrophage, respectively. ICAM-1 plays an important role in inflammatory processes and in the T-cell mediated host defense. It is also reported that ICAM-1 plays a critical role in tumor metastasis. Cytokines released during pathologic conditions, such as IFN-γ, IL-1 and TNF-α can upregulate ICAM-1’s expression. Some clinical studies showed that ICAM-1 has higher expression in many cancer cells. It is reported that NF-κB can regulate transcription of ICAM-1 in endothelial cells. However, the mechanism of regulation of ICAM-1 is indetermined yet. Our previous study found that there is a relationship between expression of E2F1 and ICAM-1 in a prostate cancer cell line DU145. In this st