食品微生物之檢驗方法-霍亂弧菌之檢驗.pdfVIP

93 年8 月署授食字第0939320313 號公告 食品微生物之檢驗方法─霍亂弧菌之檢驗 Methods of Test for Food Microbiology — Test of Vibrio cholerae 1. 適用範圍：本方法適用於食品中霍亂弧菌之檢驗。 2. 檢驗方法 2.1.工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度約為 100 呎燭光，密閉室 內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。每 15 分鐘落菌數不得超過 15 CFU/培養皿。 2.2 器具及材料 2.2.1 乾熱滅菌器。 2.2.2 高壓滅菌釜。 2.2.3 冰箱：能維持5 ±3℃。 2.2.4 吸管：已滅菌，1 mL 吸管應有0.01 mL 之刻度；5 及 10 mL 吸管應有0.1 mL 刻度。 2.2.5 培養皿：已滅菌，內徑約90~100 mm，深度約 15 mm，底皿之內外面應平坦， 無氣泡、刮痕或其他缺點。 2.2.6 稀釋用容器：附蓋之 1000 mL 廣口瓶及 100 mL 稀釋瓶或無菌袋。 2.2.7 培養箱：能維持內部溫差在±1.0℃以內者。 2.2.8 水浴：能維持水溫溫差在±0.2℃以內者。 2.2.9 攪拌均質器(Blender）或鐵胃(Stomacher)：適用於無菌操作者。 2.2.10 曲玻棒。 2.2.11 離心機：離心力可達8000 ×g 以上。 2.2.12 離心管：已滅菌，5 mL。 2.2.13 試管：13 ×100 mm 及 10 ×100 mm 試管或其他適用者。 2.2.14 低溫冷凍櫃：能保持–70 ±2℃。 2.2.15 菌種保存試管。 2.2.16 游標尺(Vernier calipers)。 2.2.17 顯微鏡：能放大至 1000 倍以上之一般光學顯微鏡。 2.2.18 載玻片及蓋玻片：適用於染色及鏡檢用。 2.2.19 接種針及接種環(直徑約3 mm)：鎳鉻合金，鉑銥或鉻線，或可拋棄式者。 2.2.20 天平：可稱量到2000 g，靈敏度為0.1 g，可稱量到 120 g 者，靈敏度為 1 mg。 2.2.21 振盪器。 2.2.22 藥勺、剪刀、小刀、鑷子及牙籤：可滅菌者。 2.2.23 .pH 測定儀。 2.2.24 燈箱：一般日光燈光源，30 瓦。 2.2.25 酒精燈、濾紙及褐色試藥瓶。 2.2.26 研缽、杵：研磨試藥用。 2.2.27 吸管尖頭(Pipette tips)：已滅菌，10 µL、20 µL、200 µL 及 1000 µL。 2.2.28 微量吸管。 2.2.29 無菌濾膜：孔徑0.45 µm 或 0.2 µm 之親水性醋酸纖維膜。 1 93 年8 月署授食字第0939320313 號公告 2.2.30 聚合酵素鏈反應器。 2.2.31 電泳槽：供DNA 電泳用。 2.2.32 照相裝置：供拍攝電泳膠片用。 2.2.33 紫外燈箱：具波長312 nm 及365 nm 紫外燈。 2.2.34 試藥 氯化鈉、氫氧化鈉、葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露糖(mannose)、甘露糖醇(mannitol)、阿 拉伯糖(arabinose)、檸檬酸鐵銨、檸檬酸鐵、磷酸二氫鈉、無水磷酸氫二鈉、磷酸氫二 鉀、磷酸二氫鉀、硫代硫酸鈉、溴甲酚紫、氯化鎂、硼酸、碳酸氫鈉、碘化鉀、去氧核 苷 三磷酸(deoxynucleoside triphosphates, dNTPs)、聚合酵素(polymerase)、溴化乙錠 (ethidium bromide)、溴酚藍(bromophenol blue)、二甲苯藍(xylene cyanol FF)、DNA 分子 量標記物質(DNA molecular weigh marker)：100-bp DNA Ladder Marker、乙二銨四乙酸 二鈉(e