食品中动物用药残留检验方法-枯草菌素之检验.pdfVIP

食品中動物用藥殘留檢驗方法－枯草菌素之檢驗 Method of Test for Veterinary Drug Residues in Foods – Test of Bacitracin 1. 適用範圍：本檢驗方法適用於畜禽水產食品中殘留枯草菌素之檢驗。 2. 檢驗方法： 2.1 工作環境：工作平臺須寬敞、潔淨、光線良好(操作平臺光度約為 100 呎燭 光) ，密閉室內換氣良好 ，儘可能沒有灰塵及流動空氣 。每 15 分 鐘落菌數不得超過 15 CFU/培養皿。 2.2 器具及材料： 2.2.1 不銹鋼圓筒：外徑8 ± 0.1 mm ，內徑6 ± 0.1 mm ，高10 ± 0.1 mm 。 2.2.2 生物分析盤(Bioassay plate) ：長24.5 cm ，寬24.5 cm ，厚2.5 cm 。 2.2.3 薄層層析板(Thin layer chromatography plate) ：長20 cm ，寬20 cm ，厚 250 µm 矽膠層析板或同級品。 2.2.4 展開槽(Developing chamber) ：玻璃製品 ，槽底需平坦 ，供薄層層析板展 開用。 2.2.5 高壓滅菌釜(Autoclave) 。 2.2.6 微量吸管(Micropipette) ：2 µL 、20 µL 、200 µL 及 1000 µL 。 2.2.7 微量吸管尖(Tips) ：10 µL 、200 µL 及 1000 µL 。 2.2.8 微量離心管(Eppendorf tube) ：1.5 mL 及2 mL 。 2.2.9 離心管(Centrifuge tube) ：已滅菌，Polypropylene 材質，15 mL 及50 mL 。 2.2.10 離心機(Centrifuge) ：轉速可達2500 × g 者。 2.2.11 培養皿：已滅菌，內徑約9 cm ，深度約 1.5 cm ，底皿之內外面應平坦 、 無氣泡、刮傷或其它缺點。 2.2.12 培養箱：能維持內部溫差在±1℃以內，並具備振盪裝置者。 2.2.13 均質機(Homogenizer) 。 2.2.14 冰箱：能維持5 ± 3℃者。 2.2.15 吸管：已滅菌，1 mL 者應有0.01 mL 之刻度；5 mL 及 10 mL 者應有 0.1 mL 之刻度。 2.2.16 吸管輔助器(Pipet-aid) 。 2.2.17 三角錐瓶：100 mL 、200 mL 、500 mL 及 1000 mL 。 2.2.18 容量瓶。 2.2.19 測徑用游標尺(Vernier calipers) 。 2.2.20 漩渦混合器(Vortex mixer) 。 2.2.21 分光光度計(Spectrophotometer) ：可測波長600 nm 吸光值，靈敏度為 0.01 或以下。 2.2.22 .乾熱滅菌器。 2.2.23 天平：靈敏度為 1 mg 或以下。 2.2.24 pH 測定儀。 1 2.2.25 真空烘箱。 2.2.26 乾燥器(Desiccator) 。 2.2.27 氮氣。 2.2.28 蠟膜(Parafilm) 。 2.3 試驗菌：Micrococcus luteus ATCC 10240(CCRC 10452) 。 2.4 試藥 ：無水磷酸二氫鉀、無水磷酸氫二鉀 、氫氧化鈉、鹽酸、甲醇、丙酮 均採用化學試藥特級，枯草菌素鋅鹽(bacitracin zinc salt)對照標準 品。 2.5 試驗菌液之製備： 將試驗菌繼代保存於營養培養基 ，每兩週移植 1 次，於35℃培養36 小時。 或取超低溫冷凍保存之菌株 ，於營養培養基上行劃線培養 ，於35℃培養36 小時。使用時，自培養基上挑取菌落，接種於營養培養液20 mL 中，於35 ℃震盪培養 24~36 小時後，以營養培養液調整菌液濃度，使菌液於分光光 度計波長600 nm 吸光值為0.8 ±