谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定 比色法（国家标准征求意见稿）.docVIP

GB/T ××××—×××× GB/T ××××—×××× PAGE 2 PAGE 1 ××××-××-××实施××××-×× ××××-××-××实施 ××××-××-××发布 谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定 比色法 Method for determination of alpha-amylase activity in cereal and cereal products— Colorimetric method （ISO 3983-1977） （征求意见稿） GB/T ××××—2007 -—— 中华人民共和国国家标准 ICS 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局 发布 GB/T ××××—×××× GB/T ×××× PAGE II PAGE I 前 言 本标准等效采用国际标准ISO 3983-1977《谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定 比色法》（英文版）。 为便于使用，本标准对原ISO 3983-1977进行了如下编辑性的修改： ——删除国际标准的前言； ——将“本国际标准”一词改为“本标准”； ——用小数点“.”代替原文中小数点“，”； 本标准由国家粮食局提出。 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。 本标准负责起草单位：南京财经大学，国家粮食局科学研究院。 本标准主要起草人： 本标准是对国家标准GB5521-89的修订。 PAGE 6 PAGE 1 谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定 比色法 范围 本标准规定了用比色法测定谷物和谷物产品α-淀粉酶活性所用仪器、试剂、分析步骤和结果计算。 本标准适用于测定谷物和谷物产品α-淀粉酶活性，也可用于测定源于真菌和细菌的α-淀粉酶干粉的活性。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和实验方法。 术语和定义 下列术语与定义适用于本标准。 β-极限糊精 β-limit dextrins 极限糊精是被β-淀粉酶完全降解了的淀粉产物。 酶活力单位 active unit 1 L溶剂从1 原理 α-淀粉酶降解β-极限糊精底物溶液，在酶促反应进程中，分别在不同时间将反应混合物等分加到碘溶液中。随着反应时间的延长，反应混合物与碘液的显色强度降低，以测定酶活性。 试剂和材料 除非另有说明，本标准仅使用确认为分析纯的试剂，实验用水为蒸馏水或去离子水。符合GB/T 6682-1992的要求。 5.1 碘贮备液：称取11.0 g碘化钾溶于少量水中，加5.50 g结晶碘，搅拌至碘完全溶解。再定容至250 5.2 碘稀释液：称取40.0 g碘化钾溶于水中，加4.00 mL碘贮备液，并稀释至1 5.3 0.05 mol/L硫酸溶液。 5.4 缓冲液：称取164 g无水乙酸钠溶于水中，加入120 mL冰乙酸，用水定容至 5.5 0.2%(m/V)氯化钙溶液。 5.6 β-淀粉酶溶液：称取10 g有酶活性的黄豆粉（粗细度为通过1.5 mm孔筛），加入85 mL水和15 mL 0.05 mol/L硫酸（5.3）充分搅匀，静置15 min，抽滤，该滤液即为β 5.7 β-极限糊精溶液：称取5.00 g（干基）可溶性淀粉于小烧杯中，加入约20 mL水混匀，将其边搅拌边缓慢倒入盛有100 mL沸水的500 mL高型烧杯（6.6）中，并用洗瓶将小烧杯中的淀粉全部转移至高型烧杯中，继续搅拌并加热，缓慢煮沸2 min。加盖表面皿，在自来水中冷却至30℃以下，加入25 mL缓冲溶液（5.4）及50 mLβ-淀粉酶溶液（5.6），在室温下放置20 h，加入1勺浮石粉，将此溶液在10 min之内缓慢煮沸，然后继续沸腾5 min以上。冷却至30℃以下，用水定容至250 mL，摇匀，过滤。滤液中加几滴甲苯，此溶液的pH值应为(4.7±0.1 注：可采用Lintner淀粉或质量相当的国产可溶性淀粉。 仪器 6.1 恒温水浴：30℃±0.1℃与20℃± 6.2 分光光度计或比色计。 6.3 秒表。 6.4 筛子：孔径为1.0 mm、 6.5 pH计。 6.6 烧杯及高型烧杯：100 mL、250 mL、500 mL。 6.7 容量瓶：250 mL、1000 mL 6.8 锥形瓶：300 mL。 6.9 移液管：5 mL、20 mL。 6.10 分析天平：精确度0.01 g。 分析步骤 7.1 分光光度