木犀草素对糖尿病脑梗死大鼠神经细胞凋亡及HSP70 mRNAFas mRNA表达影响.docVIP

木犀草素对糖尿病脑梗死大鼠神经细胞凋亡及HSP70 mRNAFas mRNA表达影响 　　[摘要] 目的 探讨木犀草素对糖尿病脑梗死大鼠神经细胞凋亡及HSP70 mRNA、Fas mRNA表达的影响。 方法 Wistar大鼠60例，随机分为对照组、模型组及木犀草素高、中、低剂量组。对照组给予常规饲料喂养；模型组及木犀草素高、中、低剂量组采用高脂高糖饮食加腹腔注射小剂量链脲霉素建立糖尿病大鼠模型，造模后，木犀草素高剂量、中剂量、低剂量组每日分别给予木犀草素200、100、50 mg/kg灌胃，模型组每日给予生理盐水2 mL灌胃，连续8周。再以线栓法建立大鼠大脑中动脉永久性缺血模型，术后24 h断头取脑，用TUNEL法和原位杂交法观察大鼠脑细胞凋亡与脑组织HSP70 mRNA及Fas mRNA的表达。 结果 木犀草素低、中、高剂量组糖尿病脑梗死神经细胞凋亡数分别为（16.42±1.39）、（11.08±2.15）、（9.25±1.98）个/高倍视野低于模型组[（29.75±2.36）个/高倍视野]，组间差异有统计学意义（均P 0.01）；HSP70 mRNA在模型组表达[（9.75±2.766）个/高倍视野]显著高于对照组[（0个/高倍视野）]（P 0.01）；低、中、高三个剂量的木犀草素组HSP70 mRNA表达分别为（11.33±2.15）、（13.92±2.15）、（14.92±1.95）个/高倍视野，均高于模型组[（9.75±2.76）个/高倍视野]（均P 0.01）；Fas mRNA在模型组大鼠脑组织阳性细胞数[（25.33±3.17）个/高倍视野]显著高于对照组[（2.67±0.95）个/高倍视野]（P 0.01）；高、中、低剂量木犀草素组大鼠脑组织Fas mRNA阳性细胞数分别为（11.92±2.41）、（12.00±2.50）、（19.75±2.54）个/高倍视野，显著低于模型组[（25.33±3.17）个/高倍视野]（均P 0.01）。 结论 木犀草素可以抑制糖尿病脑梗死大鼠神经细胞凋亡，其机制与木犀草素升高大鼠脑组织HSP70 mRNA表达，同时使Fas mRNA的表达降低有关。 　　[关键词] 糖尿病；脑梗死；木犀草素；HSP70 mRNA；Fas mRNA 　　[中图分类号] R743.32 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）01（a）-0021-03 　　缺血性脑损伤后会出现多种病理改变，坏死是引起梗死中心区神经细胞死亡的主要原因，而凋亡则是导致梗死半暗带区神经细胞死亡的主要因素[1]。凋亡细胞主要存在于半暗带区，因而凋亡能够影响最后脑梗死的面积[2]。HSP70是一种细胞内源性保护蛋白，主要参与机体耐受的形成[3-4]，有抑制细胞凋亡的作用，而Fas基因是促进细胞凋亡的重要基因[5-6]。木犀草素（Luteolin）最初是从草本植物木犀草的叶、茎、枝中被分离出而得名，其具有抗炎、抗氧化、抑制凋亡、抗过敏、抗肿瘤等多种生物学作用。为此，本实验在于观察木犀草素对糖尿病脑梗死大鼠神经细胞凋亡及HSP70 mRNA、Fas mRNA表达的影响，以探讨木犀草素对糖尿病脑梗死大鼠脑损伤的保护机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物、试剂和药品 　　雄性Wistar大鼠60只，体重180～230 g。来源于北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证：SCXK（京）2009-0003。细胞凋亡检测试剂盒（TUNEL）、HSP70及Fas原位杂交试剂盒均购于武汉博士德生物技术公司；木犀草素（98%）购于陕西慧科植物开发有限公司；链尿菌素（STZ）购于Sigma公司。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 动物模型制作 各组均先以高脂高糖饲料喂养4周，然后以STZ（30 mg/kg）腹腔注射1次，72 h后尾静脉采血测定血糖，空腹血糖 16.7 mol/L的大鼠判定为造模成功。以线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞（MCAO）模型[7]。大鼠成功麻醉后，颈部正中切口，暴露并钝性游离右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉及颈内动脉，结扎同侧CCA近心端和颈外动脉（ECA）分叉部，距颈总动脉分叉处近心端5 mm处剪口，选用头端烧成光滑杵状的国产尼龙线插入颈内动脉，以颈总动脉分叉处计算进线深度为18 mm左右，至大脑中动脉起始部以完全阻断血供，结扎颈内动脉并固定鱼线。术中，用加热垫和灯泡保持肛温在37.0～37.5℃。 　　1.2.2 动物分组及处理 60只Wistar大鼠，随机分为5组：对照组、模型组及木犀草素高、中、低剂量组，每组各12只。糖尿病性动物模型制备后，开始灌胃给药，木犀草素高剂量、中剂量、低剂量组每日分别给予木犀草素200、100、50 mg/kg灌胃