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橙皮香精油抑菌效果研究 　　[摘要]：介绍从新鲜橙皮中提取香精油的方法，并对分离得到的香精油进行了抑菌试验。结果表明，橙皮香精油体积分数在5%~20%范围内对常见的病原菌有广谱的抗菌作用。经热处理后的橙皮香精油仍具有较明显的抑菌效果。 　　[关键词]：橙皮；香精油；抑菌； 　　中图分类号：Q5文献标识码：A 文章编号：1002-6908（2007）0610064-01 　　 　　 橙是我国市售常见的食用水果之一。其较好的口感颇为众人喜爱。香精油为橙皮中有效成分之一，广泛作用于食品、饮料、糖果的调香剂及医药、化妆品中。香精油的主要成分是一种无色透明、具有诱人桔香味的萜类烯烃--柠檬烯。随橙皮种类和季节的不同，香精油中柠檬烯的含量也会有所不同，其含量大约在52.2~96.2%之间 。在以前，香精油是用在食品中赋予食品美好的感观，实际上香精油也具有良好的广谱抗菌作用，一直是人们较感兴趣的天然防腐剂之一。与芳香植物的粉末产品或其普通提取液相比，香精油的有效成分浓度更高，稳定性好便于贮藏与使用。为了探明橙皮香精油的抑菌活性的物质基础，本试验以橙皮香精油为材料，对常见病原菌的抑菌效果进行了研究。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1. 材料及仪器 　　细菌：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌；真菌: 青霉、黑曲霉,分别简称为S、E、B、P、A。以上菌种由长江大学生命科学院微生物实验室提供。 　　新鲜橙皮、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、马铃薯、蔗糖、NaCl、氯化铵、无水乙醇、HCl、NaOH，以上均为市售。 　　仪器：分光光度计、超净工作台、手提式压力蒸汽灭菌锅、电子天平、恒温培养箱、水蒸气蒸馏装置一套、电热套等。 　　1.2.橙皮香精油的提取 　　 从柑橘类果皮中提取香精油的常用方法有压榨法、水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法（SCF法）。本实验采用水蒸汽水中蒸馏法提取。此方法设备简单、成本低、产量大；水分子容易向果皮细胞组织中渗透，水置换出香精油，是精油向水中扩散，在水蒸汽作用下形成油水共沸物同时蒸出。 　　试验称取100g新鲜橙皮，水洗后尽量切碎至一定粒度，装入三颈烧瓶中，按水固比1.5:1加入蒸馏水（体积比），加入4g氯化铵作为添加剂，在常压下采用水中蒸馏法蒸馏1.5h，蒸馏出油水混合物，静置后分离出油层，得到橙皮精油（本试验提取采用各数据均为单因素试验最佳组合）。 　　1.3.抑菌试验 　　1.3.1培养基的制备 　　牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g,氯化钠5.0g,琼脂20.0g,加自来水在电炉上加热溶解，补水至1L。调PH至7.0，装瓶封好，高压蒸汽灭菌（121℃30min）后待用。 　　PDA培养基：去皮新鲜马铃薯200g切成1cm小块放于小铝锅中，加自来水置电炉上煮沸20min后，用双层纱布过滤。加入20.0g蔗糖和20.0g琼脂，加热搅拌至完全溶解，补水至1L，装瓶封好，高压蒸汽灭菌（121℃30min）后待用。 　　1.3.2测试菌种的选择 　　本试验所用菌种均为水、空气和食品中的常见菌，其中大肠杆菌的数量是水源和是食物被污染强度的标志；青霉、黑曲霉是常见的食品腐败菌。空气中分散较多的是枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌。 　　 1.3.3菌种的活化与扩大培养 　　细菌采用牛肉膏蛋白胨培养基37℃培养，真菌采用PDA培养基28℃培养。 　　将培养基制成斜面及摇瓶（液体）培养基，灭菌。将取来的菌种接入斜面活化培养96h，再分别接入摇瓶，放入恒温摇床90rpm/min，培养72h。以上能操作均在无菌条件下进行。 　　1.3.4.测试溶液的配制与处理 　　取1ml、1ml、2ml精油注入试管后，再分别加入19ml、9ml、8ml无水乙醇，充分混匀后即制成5%、10%、20%的精油溶液，随用随配，用干净盖子封口。另外还有两个热处理：一是5%的精油溶液200ml加热浓缩为10ml溶液，理想状态为精油纯液（AN）；二是取10%精油溶液20ml沸水浴30min（加盖）处理（BZ） 　　1.3.5菌悬液和含菌培养皿的制备 　　将扩大培养后的菌液0.2ml加0.4ml无菌水配成0.6ml的菌悬液无菌条件下，将无菌培养基倒如无菌培养皿中，冷却后将0.6ml菌悬液置于培养皿中央，然后用刮铲涂匀、置于恒温培养箱中12h. 　　1.3.6试验设置 　　试验采用滤纸片法进行，制直径1cm的圆滤纸片若干。湿热灭菌（121℃30min）后备用。 　　在无菌操作下，将滤纸片分别放于含菌的平板培养基上，每个培养皿中放3个滤纸片，呈三角形放置，然后在滤纸片上滴入适量的不同浓度的测试溶液，试样的每个浓度梯度设3个重复，总体有一个空白对照（用无水乙醇+无菌水代替试样），然后对个培养皿