第二章植物组织培养的基本设备与培养条件o1b4v60v.pptVIP

第二章 植物組織培養的基本設備與培養條件 進行植物組織培養需要一個合理實用的場所，一套適宜的設備和提供必要的實驗環境以及培養條件，才能確保實驗的成功。 一、組織培養的基本設備 二、組織培養的培養條件 * 一、組織培養基的基本設備 一個理想的組織培養場所宜包括下列配置。 (一)化學藥品室 (二)培養基配製室 (三)滅菌室 (四)接種室與無菌操作台 (五)無菌培養室 * (一)化學藥品室 1.藥品室要終年保持較低的溫度及相對 濕度，並避免陽光的照射。 2.固體藥品要與液態藥品分開，常用藥 品宜與不常用藥品分開。 3.危險、易燃、易爆與有腐蝕性藥品宜 分開置放。 4.要建立藥品購進和使用檔案，記錄藥 品的購進日期、數量、取用日期及使 用人員等，以利藥品的管理及工作的 進展。 * 5.藥品室要有一台-20 ℃的低溫冰箱，有機 藥品如氨基酸、維生素、細胞分裂素、 生長素及抗生素等藥品要在-20 ℃下保 存。 6.其他實驗用品如脫脂棉、濾紙及紗布等 用品應單獨放置在獨立的空間。 7.藥品室要有一個防震的實驗台，以放置 天平、電動天平以及秤量藥品用的藥 匙，秤量紙及毛刷等工具。 * (二)培養基配製室 1.培養基配製室主要進行玻璃器皿的清 洗、乾燥和消毒的工作，以及培養基的 配製。 2.配製室的基本設備包括冰箱、電爐或瓦 斯爐、微波爐、酸度計以及微量吸管 等。 3.蔗糖、瓊脂(洋菜)及粗天平等也應置放 在此區以利工作之進行。 * (三)滅菌室 1.滅菌室要有良好的通風散熱條件。 2.要配備專門的電源線路、以保障用電 的安全。 3.滅菌室內之高壓滅菌斧是一種高溫高 壓容器，操作人員應有一定的專業訓 練才能操作。 4.操作人員一定要在每一次作業時認 真、負責及細心的核對鍋內的水位、鍋 上的壓力表、放氣閥以及安全閥是否正 常，以免釀成事故。 * (四)接種室與無菌操作台 接種室是進行植物組織培養無菌操作的場所，對組織培養的成功與否十分重要。接種室最好有緩衝間和雙層門窗，以防止灰塵和微生物的汙染。室內最好裝置滅菌的紫外燈，並經常噴灑殺菌劑來抑制微生物的生長。 * 工作人員在進入接種室之前，要在緩衝間內更換衣服、鞋帽、穿好工作服、戴上口罩、防塵帽，換上拖鞋才能進入接種區。接種室內放置一定數量的無菌操作台。操作前要將接種室及無菌操作台的紫外燈至少在作業前20分鐘打開，但照射時間也不要過長。殺菌完成後，稍停一段時間後工作人員再進入室內工作，因紫外燈產生的臭氧對人體有輕微的危害。 * 無菌操作台由進風口、鼓風機、出風口以及無菌工作台面等幾部分構成。進風口的空氣經過過濾裝置，濾去空氣中的塵埃及微生物，然後由鼓風機將潔淨無菌的空氣由出風口送出，以維持台面的無菌狀態。 * (五)無菌培養室 1.無菌培養菌要保持恆溫、恆濕、無塵狀 態。室內溫度維持在25±3℃範圍，相對濕度 保持在50～60%之間。 2.培養室內裝置培養架，每個架子分若干 層，每層的高度在40公分左右。架子 的寬度約45公分，每層裝置2～3支 40W的日光燈。 3.培養室內要裝置定時器以自動控制光照 及黑暗的週期。 * (六)組織培養的儀器設備及用品 1.儀器設備 無菌操作台、高壓滅菌斧、酸度計、天平、 電動天平、普通冰箱、-20℃低溫冰箱、烘箱、 解剖顯微鏡、放大鏡、光學顯微鏡、顯微照像 設備、高速離心機、微波爐、電爐、真空馬 達、水浴鍋、迴轉培養器、震盪培養器、微量 吸管等。 2.小型用品 鑷子、解剖刀、酒精瓶、酒精燈、噴霧器。 * 3.玻璃器皿 三角瓶(50～2000ml)、燒杯(20～ 2000ml)、量筒(10～2000ml)、容量瓶、吸 管、螺口帶蓋試管(18cm)、培養皿、載玻 片、蓋玻片。 4.其他用品 打孔器、塑膠籃、錫箔紙、石蠟封口 膜、不銹鋼筒(消毒培養皿用)等。 * 二、組織培養的培養條件 1. 溫度 2. 光度 3. pH值 4. 營養需求