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槟榔十三味丸对抑郁模型大鼠海马和前额叶皮层AC―cAMP―PKA信号通路影响 　　[收稿日期] 2013-12-26 　　[基金项目] 国家自然科学基金项目 　　[作者简介] *佟海英，副主任医师，副研究员，硕士生导师，Tel：（010E-mail：haiyingtong@ 　　[摘要] 目的：观察蒙药槟榔十三味丸对慢性应激抑郁模型大鼠海马和前额叶皮层AC-cAMP-PKA信号通路的影响。方法：将Wistar雄性大鼠，根据蔗糖水消耗量随机分为正常对照组、模型组、氟西汀组（3.3 mg?kg-1）、槟槟榔十三味丸低、中、高剂量组（0.25，0.5，1 g?kg-1），共6组，每组10只。除正常对照组外，其余大鼠均采用慢性轻度不可预见性应激结合孤养方法制备抑郁模型，造模同时灌胃给药，每日1次，连续给药28 d，取海马和前额叶皮层，用放射免疫分析法（RIA）测定AC活性；酶联免疫吸附法（ELISA）测定cAMP和PKA含量。结果：慢性应激抑郁模型大鼠海马、前额叶皮层中AC活性、cAMP和PKA含量均较空白对照组显著下降（P0.05或P0.01），氟西汀组、槟榔十三味丸组大鼠海马、前额叶皮层中AC活性、cAMP和PKA含量均较模型组显著升高（P0.01或P0.05）。尤其槟榔十三味丸高剂量组作用显著。结论：抑郁模型大鼠海马、前额叶皮层AC-cAMP-PKA信号通路下调，而槟榔十三味丸可以通过上调海马和前额叶皮层AC-cAMP-PKA信号通路而发挥抗抑郁作用。 　　[关键词] 槟榔十三味丸；抑郁症；海马；皮层；AC；cAMP；PKA 　　蒙医理论认为，“赫依”为抑郁症发病的主要病因。在临床实践中，以槟榔十三味丸（高尤-13）为代表的具有调节“赫依”功效的蒙药在抑郁症治疗中取得了较好疗效。课题组在以往的实验中观察到槟榔十三味丸对小鼠强迫游泳应激模型、利血平拮抗模型以及大鼠慢性应激抑郁模型中均呈现明显的抗抑郁作用[1-2]。但其分子机制的研究尚未见报道。本研究采用慢性轻度不可预见性应激（CUMS）结合孤养方法制备大鼠抑郁模型，测定大鼠海马和前额叶皮层腺苷酸环化酶（AC）活性及环磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A（PKA）含量的变化，旨在从AC-cAMP-PKA信号通路探讨槟榔十三味丸抗抑郁作用机制。 　　1 材料 　　1.1 动物 清洁级Wistar雄性大鼠60只，体重180～200 g，由斯贝福（北京）实验动物科学技术有限公司提供，合格证号SCXK（京）2011-0004。以清洁级大小鼠维持饲料饲养，由北京科澳协力饲料有限公司提供，合格证号京饲审（2009）06166。动物饲养于北京中医药大学SPF级动物房，整个实验过程中动物自由摄食和饮水（造模过程中禁食和禁水除外），室温20～22 ℃（冷、热刺激除外），相对湿度为60%～70%，光照周期为12 h，7：00―19：00光照，19：00―7：00黑暗（昼夜颠倒刺激除外）。 　　1.2 药物 槟榔十三味丸（国药准字内蒙古蒙药股份有限公司，批号120805）；盐酸氟西汀分散片（Patheon France生产厂，产品批号2076A，分包装厂为礼来苏州制药有限公司，分包装批号2076AA）；羧甲基纤维素钠（CMC-Na）（国药集团化学试剂有限公司，批；蔗糖（北京化工厂，批。 　　1.3 试剂与仪器 [125I] cAMP放射性同位素免疫试剂盒（北京环亚泰克生物医学技术有限公司，批号2013061121）；cAMP（美国Rapidbio公司，批号201305122）；PKA（美国Rapidbio公司，批号201305173）；考马斯亮兰G-250（南京建成生物工程研究所，批；Kontro-28Dγ计数仪（瑞士Kontro公司）；J2-21低温离心机（美国Beckman公司）；JY99-ⅢB型超声器（宁波新芝科器研究所）；5415R高速离心机（德国Eppendorf公司）；Multiskan MK3型酶标仪（美国Thermo Scientific公司）；ELx50自动洗板机（美国Biotek公司）；电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）；1/10万ES125SM电子天平（瑞士precisa公司）；敞箱和电击足底箱（自制）。 　　2 方法 　　2.1 分组和给药 Wistar雄性大鼠适应性喂养1周后禁水24 h，给予1%蔗糖水，测定1 h内的消耗量，根据蔗糖水消耗量随机分为正常对照组、模型组、氟西汀组（3.3 mg?kg-1?d-1）、槟榔十三味丸低（0.25 g?kg-1?d-1）、中（0.5 g?kg-1?d-1）、高（1 g?kg-1?d-1）剂量组，每组1