槲皮素对兔骨关节炎模型关节液中IL―1βTNFα水平影响.docVIP

槲皮素对兔骨关节炎模型关节液中IL―1βTNFα水平影响 　　摘要：目的：观察中药槲皮素对骨关节炎动物模型关节液中细胞因子IL-1β、TNFα水平的影响。方法：按照hulth法建立兔膝关节骨关节炎模型，20只实验动物随机等分成4组：①槲皮素组。②塞来昔布组。③生理盐水组。④模型组。各治疗组分别给予药物治疗4周，然后抽取关节液。ELISA法检测关节液中IL-1β、TNF α的含量。结果：槲皮素组、塞来昔布组关节液中.IL-1β、TNFα水平均显著低于模型组（P0.01）。结论：槲皮素、塞来昔布能够抑制OA模型关节滑液中IL-1B、TNFα的水平。、 　　关键词：骨关节炎；槲皮素；塞来昔布 　　中图分类号：Q959.836；R684.3 文献标志码：A 文章编号：1008―2409（2015）04―0005―04 　　骨关节炎（osteoarthritis，OA）是一种随着年龄增长而发病率也逐渐增加的进行性关节疾病，发病机理至今尚未十分明确，故也没什么特效的治疗药物。近年的研究表明炎性细胞因子IL-1β、TNFα在OA的发生发展过程中起到了非常重要的作用，OA动物模型及OA的关节中均检测出较高水平破的IL-1β与TNFα，IL-1β和TNFα是主要炎性细胞因子参与骨关节炎（OA）。这些细胞因子干扰软骨细胞代谢，抑制细胞外基质蛋白的合成，促进分解代谢的蛋白酶的释放，坏了软骨细胞，从而形成骨关节炎，被认为是在关节炎发病机制中起关键作用的促炎症性细胞因子。IL-1β是重要的炎症介质，参与关节软骨破坏的起始和进展。在正常人关节液中IL-1含量极少，IL-1B占主要成分。然而在OA患者关节液中IL-1B含量明显升高，且与OA的病理表现呈正相关。TNFα可刺激滑膜细胞产生PGE2，增加软骨下骨的吸收，引起关节软骨Ⅱ型胶原的破坏，并且与OA的疼痛有着密切的关系，此外OA发生时滑膜细胞和软骨组织大量分泌TNFα，促使滑膜组织的增生，并诱导成纤维细胞增生，形成大量的血管翳，致关节软骨破坏，最终可以导致关节功能障碍。 　　中医药治疗是我国防治骨关节炎的一大特色，中药不仅可以调节机体免疫功能、减少复发及改善特应性体质，许多中药还可减少蛋白酶和细胞因子的形成，对于骨关节炎疼痛的缓解，关节功能的改善有明显的疗效，且不良反应小，槲皮素又称栎精、槲皮黄素等，是一种植物源性五羟基黄酮类化合物，具有较高的营养与药用价值。槲皮素多以苷的形式存在于一些水果、蔬菜和草本植物中。槲皮苷等在经过酶或酸作用后，水解成槲皮素。日前已在上百种中草药中发现槲皮素的存在，且已有研究证实槲皮素具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、免疫调节等多种生物活性，榭皮素对硝化应激诱导损伤的细胞具有保护作用，其机制可能与榭皮素可提高细胞内ERK通路有关。 　　实验探讨槲皮素对兔骨关节炎模型关节液中IL-1β、TNFot水平的影响作用机制，为临床应用提供实验依据。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物 　　健康成年雄性新西兰白兔22只，体重2.0～2.5 kg，由桂林医学院实验动物中心提供。 　　1.2实验药品与试剂 　　槲皮素：由北京友谊医院中药房煎制；塞来昔布：200 mg/粒，由美西尔大药厂生产；家兔细胞因子IL-1B、TNFot ELISA检测试剂盒，由解放军301医院放免所提供。 　　1.3实验仪器 　　-20℃低温冰箱；恒温箱；离心机；SN-695B型放免测量仪；普通病理设备。 　　1.4动物模型与实验分组 　　22只新西兰兔2只留做检测模型是否成功用，其余22只随机分为4组；每组5只。于动物手术室切断前交叉韧带，参照文献方法建立Hulth模型：将动物从耳缘静脉麻醉后仰卧于手术台上，无菌条件下取膝关节内侧纵切口长约2 cm，显露膝关节，然后切断前交叉韧带及内侧副韧带，完整切除内侧半月板，保留关节软骨面，手术后不固定伤肢，给予自由活动，给予青霉素20×104/d肌肉注射3 d，预防感染，手术后7 d驱赶动物在小动物跑台上奔跑，30min/d，分2次驱赶，驱赶动物4周后即得明显的模型。4周后处死检测兔，解剖膝关节并行大体观察及取股骨内髁关节软骨标本送普通病理检查，结果证实兔膝关节骨关节炎模型制作成功（图1、2）。 　　1.5实验方法 　　1.5.1模型成功后即给予药物治疗①槲皮素组：榭皮素每日药汁灌胃10.31 mg?kg-1d-1。②塞来昔布组：塞来昔布每日灌胃1次，20 mg/次。③盐水组：每日灌胃生理盐水10.31 mg?kg-1?d-1。④空白组：无药物治疗。全部动物治疗饲养4周，然后抽取关节液。 　　1.5.2抽取关节液：施行膝关节穿刺抽取关节液，用2.5 ml一次性无菌注射器加入生理盐水1 ml对膝关节反复抽吸使冲洗液混匀，最后抽干膝关节腔液体。将抽吸的