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栀子对大鼠肠道菌群及血清细胞因子影响 　　【摘要】目的：观察栀子对大鼠肠道菌群和血清细胞因子的影响。方法：将40只大鼠随机分成正常对照组、抗生素对照组和栀子高/中/低剂量组，抗生素对照组和栀子高、中、低剂量组分别给予盐酸林可霉素和不同剂量栀子水提物灌胃，正常对照组代以生理盐水，连续 14d。观察各组大鼠一般情况，检测大鼠肠道双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌和肠杆菌菌群数量，及血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、γ-干扰素（IFN-γ）表达水平。结果：与正常对照组比较，抗生素对照组和栀子中、高剂量组大鼠出现腹泻，体质量明显下降（P001）；抗生素对照组大鼠肠道内4种菌群数量均发生明显改变（P005或P001）；栀子中、高剂量组大鼠肠杆菌菌群数明显降低（P005或P001），双歧杆菌、乳酸杆菌和肠球菌菌群无明显变化；栀子中剂量组大鼠血清TNF-α水平明显下降（P005）；栀子高剂量组大鼠血清TNF-α和IL-6水平明显降低（P005或P001）。结论：栀子对肠道菌群有一定影响，但不引起肠道菌群失调，栀子可下调血清TNF-α和IL-6水平，发挥免疫调节作用。 　　【关键词】栀子；大鼠；肠道菌群；细胞因子 　　【中图分类号】R2855【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）07-0029-03 　　中药栀子（Gardenia jasminoides Ellis）是茜草科植物栀子的干燥成熟果实，具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒的功效，临床主要用于急性黄疸型肝炎、膀胱炎、目赤肿痛、上消化道出血等症[1]。栀子性味苦、寒，归心、肺、三焦经，为常见的苦寒药物。历代医药学家认为其苦寒碍胃，有耗气伤阴之弊。现代研究表明[2]，苦寒中药可通过干预肠道菌群的种类、数量、比例、定位等生态因素，影响肠道代谢和免疫防御等功能。本研究拟建立不同剂量的栀子水提物灌胃模型，观察栀子对大鼠肠道中4种优势菌群和血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、γ-干扰素（IFN-γ）表达的影响，探讨苦寒药栀子对肠道生物学功能的调节作用，为其临床的合理使用提供科学依据。 　　1仪器与材料 　　11动物SPF级SD大鼠40只，雌雄各半，体重（200±20）g，购于重??滕鑫生物技术有限公司，许可证号：SCXK-（军）2012-0011。 　　12材料栀子购于北京同仁堂贵阳药店，经贵阳中医学院生药教研室鉴定为正品。盐酸林可霉素注射液（河南天方?业有限公司，批号070120049），双歧杆菌BS培养基、MRS培养基、胆汁七叶苷叠氮钠琼脂（青岛海博生物技术有限公司），伊红美蓝琼脂（EMB培养基，杭州微生物试剂有限公司），大鼠TNF-α、IL-6和IFN-γ ELISA检测试剂盒（武汉博士德生物有限公司）。 　　13[JP2]仪器SW-CJ-1F超净工作台（苏州净化）；厌氧培养袋（日本三菱）；371型培养箱（美国Thermo公司）；ELX800全自动酶标仪（美国BioTek公司）；高速低温离心机 5804D（德国Eppendorf公司）。[JP] 　　2方法 　　21中药水提物的制备按照规范制剂要求，常规制备栀子水提液，调整浓度相当于生药2g/mL冷藏备用。 　　22动物分组及处理取40只大鼠随机分成正常对照组、抗生素对照组及栀子高、中、低剂量组，每组8只。栀子水提液以成年人（按60kg计算）常规用药剂量的等效剂量为中剂量，大剂量为中剂量 5倍，小剂量为中剂量的 1/5。即栀子高、中、低剂量组分别以75、15、03g/kg灌胃给药，抗生素对照组给予盐酸林可霉素灌胃[3]，各组给药体积为2mL/只，正常对照组给予等体积生理盐水，每日1 次，连续 14d。 　　23一般情况观察观察和记录各组大鼠活动、饮食、排便情况，用药第1天、第7天、第14天称量各组大鼠体质量，记录大鼠体质量变化。 　　24主要菌群分析末次给药24h后，大鼠股静脉取血，4℃静置过夜，离心取上清，置于-20℃冰箱待测。参照文献[4]，处死各组大鼠，剪开腹腔，无菌操作取盲肠内容物01g，[JP2]放入无菌试管内，加09mL生理盐水，均匀震荡15min，将震荡好的溶液进行10倍系列稀释至10-9，根据预实验结果选用合适的稀释度，分别接种于各种培养基中，双歧杆菌：BS培养基，37℃厌氧培养72 h；乳杆菌：MRS培养基，37℃厌氧培养48h；肠杆菌：EMB培养基，37℃培养48h；肠球菌：胆汁七叶苷叠氮钠琼脂，37℃培养48h。培养结束后计数菌落，根据稀释度换算每g粪便中的细菌数，结果以菌落形成单位/克（CFU/g）的对数表示，即lg CFU/g。[JP] 　　25血清细胞因子水平检测取冻存血清，采用ELISA法，测定TNF-α、IL-6和