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水产品中氯霉素残留检测技术研究进展 　　摘要:介绍了水产品中氯霉素残留检测分析方法的研究进展,并阐述了各检测方法的特点及检出限,以期为水产品氯霉素残留检测提供参考。 　　关键词:氯霉素;检测;水产品 　　中图分类号:O69文献标识码:A文章编号: 1007-5739(2009)20-0340-02 　　 　　氯霉素(chloramphenicol,CAP)于1947年从委内瑞拉链霉菌(Streptomyces venezuela)的培养滤液中分离出的结晶性抗菌素,是第一个采用化学合成法生产的抗生素,它是一种有效的广谱抗生素,对多种病原菌有较强的抑制作用。在水产养殖业中,也常用氯霉素治疗各种传染性疾病。但研究表明,氯霉素存在严重的毒副作用,能抑制人体骨髓造血功能,引起人类的再生障碍性贫血,粒状白细胞缺乏症,新生儿、早产儿灰色综合症等疾病,低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性,因此氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视,欧盟、美国等均在法规中规定CAP残留限量标准为“零允许量”。我国是一个水产养殖大国,养殖规模不断扩大,但养殖过程中滥用抗生素,已成为一个严重的水产品安全问题[1]。 　　氯霉素残留检测方法的建立始于20世纪70年代,随着新技术的不断出现,氯霉素的检测方法有很多种,大致可分为3类,即微生物法、化学分析法、免疫学检测法。 　　 　　1微生物法 　　 　　微生物检测氯霉素法可大体分为2种:一种是基于抗生素对微生物生长的抑制作用,主要有棉签法、杯碟法、纸片法、TTC法、戴尔沃检测、BY法等;另一种是由于微生物对氯霉素敏感而引起生化特性的变化,如氯霉素对鳆发光杆菌的抑光作用,通过检测发光强度的变化来检测氯霉素的含量。 　　(1)棉签法。棉签法是检测动物体中抗生素残留的现场试验方法。该方法是用棉签(拭子)采取动物体内的组织液,然后将其放置于涂满枯草杆菌的培养基中保温过夜。根据棉签周围的抑菌圈有无以及大小来判断抗生素残留。梅先之等(1997)曾用该法检测鲤鱼中的CAP残留含量,该方法的检测限是1mg/kg,但容易造成漏检。 　　(2)杯碟法。样品经处理后,注入牛津杯中,与含菌液的鉴定平板贴合,培养后,根据抑菌圈有无及大小判定结果。采用不同的试验菌种,可检测不同的抗生素[2]。该方法灵敏度比棉签法高,能排除一定的干扰,但要进一步提高灵敏度很困难。 　　(3)TTC法。在样品中加入嗜热链球菌经培育2.5～3.0h后,加入4% TTC指示剂(三苯基四氮唑)水浴培养30min,颜色不发生变化为阳性;如果样品呈红色则为阴性。该法费用低,操作简单;缺点易出现假阳性。 　　(4)戴尔沃检测法。原理是利用微生物-嗜热芽胞菌在64℃条件下培养2.5～3.0h后会产酸,酸引起指示剂BCP(溴甲酚紫)变为黄色;若样品中不含抗生素,培养后样品呈黄色,如样品中含有抗生素,嗜热芽胞菌生长受到抑制而无法产酸,指示剂将不变色。该法具有操作方便、容易判断、结果可靠、费用适中等优点;但也易出现假阳性。 　　(5)发光细菌法。王亚群等[3]建立了一种发光细菌检测氯霉素残留的新方法。在鳆发光杆菌培养液中添加不同浓度的氯霉素溶液,通过控制菌体起始发光强度,菌液与氯霉素作用时间,菌液与氯霉素体积比等建立发光细菌检测水产品中氯霉素体系。该体系对氯霉素的检测灵敏度可以达到0.1ng/mL,该法成本较低、操作快速简单、检测限低。作为水产品中痕量氯霉素残留的一种快速、灵敏的检测方法。 　　 　　2免疫分析法 　　 　　免疫分析法是以抗原与抗体特异性、可逆性结合反应为基础的一类常用分析方法。由于氯霉素是半抗原,不能刺激机体产生抗体,将氯霉素的二氯酰胺醇和硝基苯结构和大分子蛋白结合后均可作为完全抗原有效制备相应的抗体,在此基础上建立酶联免疫竞争法测定氯霉素含量,常用的有酶联免疫法(ELISA)、放射免疫法(RIA)、固体免疫传感器、化学发光酶免疫法(CLEIA)等。 　　(1)酶联免疫法(ELISA)。ELISA法简单、快速、灵敏度高、重复性较好,适用于大规模CAP的残留筛选检测,目前市场上有多种氯霉素检测试剂盒供应。陈雪昌等[2]报道了采用德国R-Biopharm 公司生产的RIDASCREEN 氯霉素试剂盒检测虾肉中的氯霉素残留方法,该法平均检测下限为0.012 5μg/kg,回收率为88.1%～94.4%,RSD为2.98%～6.67%。美国IDS公司2009年3月新上市了一步法快速氯霉素ELISA试剂盒,是目前市面上操作时间最短的产品,检测时间为20 min。但是ELISA的缺点在于影响因素较多,易出现大量假阳性结果。 　　(2)化学发光酶免疫法(CLEIA)。CLEIA法是一种采用化学发光剂做为酶反应底物的